四降水技术.ppt

沉淀技术;生物分离过程的一般流程;沉淀：利用沉析剂使生化物质在溶液中的溶解度降低而形成无定形固体沉淀的过程。 沉淀法的目的： 通过沉淀达到浓缩的目的； 沉淀方法可有选择地沉淀杂质或有选择地沉淀所需成分，初步纯化 ； 将已纯化的产品由液态变成固态，加以保存或进一步处理。 沉淀法是最古老的分离和纯化生物物质的方法，但目前仍广泛应用在工业上和实验室中。;沉淀法的分类;蛋白质表面性质 P49;楞牲烧朴倦光虎恤言零葫昔政蚂愁蹬减列翁厢宣剧肃铡巴建缺猛砧避寸略四降水技术四降水技术;蛋白质的溶解特性;防止蛋白质凝聚沉淀的屏障 P50;;盐析 P51;盐析法机理 P51;钉诵蓉洱崔仓蓉近绊纳霍付脸腑桑超代域虏码饰艰稠秤甫巍躯良阉采荆建四降水技术四降水技术;盐析过程;;盐析作用要强 盐析用盐需有较大的溶解度 盐析用盐必须是惰性的 来源丰富、经济;盐析用盐的选择 P52;盐析中常用的盐：硫酸铵、硫酸钠、磷酸钾、磷酸钠 硫酸铵是最常用的蛋白质盐析沉淀剂 （1） 价廉 ； （2） 溶解度大，温度系数小，许多蛋白质可以盐析出来； （3）硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好， （4）不易引起蛋白质变性。 ;盐析操作(加盐方式）P53;㏒ S=β-ＫsＩ S—蛋白质的溶解度，g/L; I－离子强度， I=1/2∑mizi2 mi—离子 i的摩尔浓度； Zi—所带电荷 β—常数，图中截距 Ks—盐析常数，图中直线斜率;;用盐析法分离蛋白质的二种方法;一般说来，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低。 在进行分离的时候，一般从低离子强度到高离子强度顺次进行。 每一组分被盐析出来后，经过过滤或冷冻离心收集，再在溶液中逐渐提高中性盐的饱和度，使另一种蛋白质组分盐析出来。 组成相近的蛋白质，分子量越大，沉淀所需盐的量越少；蛋白质分子不对称性越大，也越易沉淀。;盐析的影响因素：pH值;盐析影响因素：温度的影响;盐析的影响因素：蛋白质浓度;盐析注意事项;盐析注意事项;盐析法特点：;;等电点沉淀法;图16-10表示大豆蛋白的溶解度随pH的变化情况。;等电点沉淀法注意事项;;概念：在含有溶质的水溶液中加入一定量亲水的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出。 有机溶剂对于许多蛋白质（酶）、核酸、多糖和小分子生化物质都能发生沉淀作用，是较早使用的沉淀方法之一。 优点：1）分辨能力比盐析法高，即蛋白阿质等只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀；2）沉淀不用脱盐，过滤较为容易； 缺点:1）对具有生物活性的大分子容易引起变性失活，2）操作要求在低温下进行。3）成本高 总体来说，蛋白质和酶的有机溶剂沉淀法不如盐析法普遍。;有机溶剂沉淀法机理;有机溶剂沉淀法机理;常用的有机溶剂沉析剂;1、温度使用有机溶剂沉淀时，操作必须在低温下进行 有机溶剂与水混合时，会放出大量的热量，使溶液的温度显著升高，从而增加有机溶剂对蛋白质的变性作用，有机溶剂要缓缓加入，防止溶液局部升温。 温度还会影响有机溶剂对蛋白质的沉淀能力，一般温度越低，沉淀越完全。 因此，所用的有机溶剂须预先冷却到-10－-20℃；在使用有机溶剂沉淀生物高分子时，整个操作过程应在低温下进行 。;2、pH值： pH多控制在待沉蛋白质的等电点附近。 3、样品浓度：样品较稀时，将增加有机溶剂投入量和损耗；样品太浓会增加共沉作用 。一般认为蛋白质的初浓度以0.5～2％为好，粘多糖则以1～2％较合适。 4、中性盐浓度：较低浓度的中性盐存在有利于沉淀作用，减少蛋白质变性。一般中性盐浓度以0.01～0.05mol/L为好，常用的中性盐为醋酸钠、醋酸铵、氯化钠等。 5、某些金属离子：一些金属离子如Ca2+、Zn2+等可与某些成阴离子状态的蛋白质形成复合物，这种复合物溶解度大大降低而不影响生物活性，有利于沉淀形成，并降低溶剂用量。;非离子型聚合物;机理：架桥与静电 离子型多糖聚合物，酸性多糖羧甲基纤维素、海藻酸钠，食品蛋白的沉淀。 合成的离子聚合物： 聚丙烯酸（pH 2.8 90%蛋白沉淀） 聚苯乙烯季胺盐（pH 10.4, 95% 蛋白沉淀） 聚甲基丙烯酸 聚乙烯亚胺;成盐类复合物沉淀;１） 金属离子沉淀;金属离子沉淀蛋白质;2．有机盐法含氮有机酸如苦味酸、苦酮酸、鞣酸等能与有机分子的碱性功能团形成复合物而沉淀析出。 但此法常发生不可逆的沉淀反应 3．无机复合盐法：如磷钨酸盐、磷钼酸盐等。 以上盐类复合物都具有很低的溶解度，极易沉淀析出。 若沉淀为金属复合盐，可通以H2S使金属变成硫化物而除去； 若为有机酸盐或磷钨酸盐，则加入无机酸并用乙醚萃取，把有机酸和磷钨酸等移入乙醚中除去，或用离子交换法除去。;亲和沉淀affinity precipitation ;亲 和 沉 淀 ;16.9 选择性变???沉淀法;选择性分离核酸;各种沉淀方法应用范围;yo