rnai干扰wdr79基因对肺腺癌a549细胞增殖的抑制效应 - open .pdf

网络出版时间：2014-09-03 13:12 网络出版地址：/kcms/doi/10.11844/cjcb.2014.10.0438.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2014, 36(10): DOI: 10.11844/cj cb.2014.10.0438 RNAi干扰WDR79基因对肺腺癌A549细胞 增殖的抑制效应 袁 平 王志田 吕 望 泮 辉 杨运海 胡 坚* (浙江大学医学院附属第一医院, 杭州310003) 摘要 通过RNA干扰技术沉默端粒酶关键组分WDR79的表达, 采用PCR法、Western blot 、 免疫荧光共聚焦、Southern blot 、MTT 、流式细胞术(FCM)分别检测WDR79 siRNA瞬时转染A549 细胞后WDR79基因和蛋白的表达水平, 端粒酶和端粒的结合情况和端粒长度变化、细胞生长增 殖变化、细胞周期的变化及细胞凋亡率, 探讨该基因的沉默表达对A549细胞的抑制作用。结果表 明, WDR79 siRNA瞬时转染A549细胞显著降低WDR79 mRNA及蛋白水平(P0.05), 端粒和端粒 酶的结合水平明显减少(P0.05), 细胞增殖的活力被抑制(P0.05), 干扰后停留在S期的细胞减少 (P0.05), 停留在G 期的细胞增多(P0.05) 。提示WDR79 siRNA 的瞬时转染可显著降低WDR79基 1 因及蛋白的表达, 并有抑制肺腺癌A549细胞的生物学效应, 进一步探索了WDR79基因在肿瘤发生 发展中的重要作用, 并在为肺癌的治疗中寻找更有效的靶点提供了实验证据。 关键词 肺腺癌; WDR79; 端粒酶; A549细胞 The Inhibitory Effect of WDR79 RNAi on the Proliferation of Human Lung Cancer A549 Cells Yuan Ping, Wang Zhitian, L Wang, Pan Hui, Yang Yunhai, Yuan Xiaoshuai, Hu Jian* ü (First Affiliated Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 310003, China) Abstract WDR79 is a telomerase holoenzyme which is notably enriched in Cajal bodies (CBs), it facili- tates the recruitment of telomerase to CBs in HeLa cells. We achieved down-regulation of WDR79 expression in A549 cells by conducting transient WDR79 siRNA transfection. Real-time PCR and Western blot assays were used to evaluate the mRNA and protein