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实用仪器分析 ·4· 模块四 高效液相色谱法 项目一 认识和使用高效液相色谱仪 任务驱动 高效液相色谱分析方法的分析原理、理论与气相色 谱法分析法有许多相似之处。高效液相色谱分析方法是 以液体为流动相，借助高压输液泵获得相对较高流速、流 量或压力恒定的液体以提高分离速度，采用颗粒极细的高 效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种分析方法。 与气相色谱分析法不同的是，高效液相色谱法更适合于热稳定性差，不易挥发（相 对分子质量较大）的许多物质的分离和分析，因而应用范围更为广泛。有机物总数的 75% ～80%原则上都可用高效液相色谱法来进行分离、分析。能用气相色谱法分析的有 机物不到20% 。高效液相色谱分析方法是气相色谱法分析方法的发展、完善。 技术上，流动相改为高压输送，输送压力可高达 30 ～60 MPa ；流速一般可达1 ～ 10 mL/min 。使分析时间大大缩短，复杂试样一般少于 1 h 。色谱柱是以特殊的方法用 小粒径的填料填充而成，从而使色谱柱的柱效大大提高。由于广泛采用高灵敏度的检测 器，进一步提高了分析的灵敏度，如荧光检测器灵敏度可达 10−11 g 。另外，试样用样 量少，一般几个微升。所以高效液相色谱法具有高压、高速、高效、高灵敏度、适用 模块四 高效液相色谱法 ·5· 范围广、试样用量少等特点。 培养目标 （1 ）认识高效液相色谱仪的基本组成和基本结构； （2 ）掌握流动相的配制方法和处理方法； 实用仪器分析 ·6· 任务一 认识高效液相色谱仪的基本组成 活动一 准备仪器与试剂 准备仪器 高效液相色谱仪、减压过滤装置、0.45 μm 有机滤膜、超声波发生器、微量进样 器（平头、100 μL 1 只）、容量瓶（50mL 4 个）。 准备试剂 色谱纯试剂（苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯），流动相甲醇（色谱纯）、超纯水。 活动二 认识仪器 大连依利特分析仪器有限公司新一代高效液相色谱仪—— iChrom 5100 某配置及 外形如图 4- 1 所示。 模块四 高效液相色谱法 ·7· 图4- 1 iChrom 5100 外形 高效液相色谱仪基本组成系统如图 4-2 所示。 图4-2 高效液相色谱仪基本组成 1. 高压输液系统 高压输液系统通常包括贮液器、高压输液泵、过滤器以及梯度洗脱装置等。高 压输液泵是高效液相色谱仪的关键部件，其作用是将流动相以稳定的流速或压力输 实用仪器分析 ·8· 送到色谱柱。高压输液泵按输液性能可分为恒压泵和恒流泵两类。目前，高效液气 相色谱仪普遍采用的是往复式恒流泵，特别是双柱塞型往复泵，具有液路缓冲器， 可获得较高的流量稳定性，尤其适用于梯度洗脱。几种不同类型的高压输液泵如下 所示。 （1 ）串联式柱塞往复泵部分可视部件 ，如图4-3 所示。 图4-3 串联式柱塞往复泵部分可视部件 串联式柱塞往复泵的工作原理 ，如图4-4 所示。 （2