基于转录组测序对翘嘴鳜(siniperca chuatsi) 2 种肌球蛋白重链基因的 .pdf

第38 卷 第3 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.38, No.3 2 0 1 7 年 6 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Jun., 2017 DOI: 10.11758/yykxjz.20160414001 / 基于转录组测序对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi) 2 种肌球蛋白重链基因的克隆与分析* 1,2 1 1 1 1,2① 陈之航 董浚键 孙成飞 田园园 叶 星 (1. 中国水产科学研究院珠江水产研究所 广州 510380 ； 2. 上海海洋大学水产与生命技术学院 上海 201306) 摘要 肌球蛋白重链(Myosin heavy chain ，MYH)是骨骼肌粗肌丝的重要组成单位，其表达量高低 影响肌纤维的组成和肌肉生长。为了解其在翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)早期生长过程中的作用，本研 究从前期生长差异显著的2 组(快长组和慢长组)翘嘴鳜幼鱼转录组差异表达Unigene 中筛选出2 个 MYH 基因，RACE (Rapid amplification of cDNA ends)克隆到其全长cDNA(MYH-7a ，MYH-7b)。 MYH-7a 全长为6071 bp ，开放阅读框为5820 bp ；MYH-7b 全长为5896 bp ，开放阅读框为5745 bp。 序列分析显示，2 个MYH 均有Loop1 、Loop2 环、ATP 结合位点等关键结构域；进化树聚类分析显 示，MYH-7a 与MYH-7b 均属于慢肌球蛋白。实时荧光定量PCR 验证发现，其在快长组样本中表 达量显著高于慢长组，与转录组测序结果一致；检测其在翘嘴鳜心肌、红白肌和皮肤等 14 种组织 的表达水平，结果显示，MYH-7a 主要在心肌中表达，而MYH-7b 主要在红肌中表达；在胚胎发育 不同阶段，二者随着胚胎发育的进行，表达量不断增加；在幼鱼早期生长过程(孵化出膜后15 dph、 30 dph 和60 dph) 的翘嘴鳜白肌中，在15 dph 和30 dph 快长组的表达量显著高于慢长组，而到60 dph 时快长组的表达量均显著低于慢长组。翘嘴鳜MYH-7a、MYH-7b 在快长组与慢长组鱼中的差异表 达提示它们在翘嘴鳜胚胎及其早期生长发育过程中发挥重要作用。 关键词 翘嘴鳜；转录组测序；肌球蛋白重链；cDNA 克隆；表达分析 中图分类号 S917.4 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2017)03-0051-11 肌球蛋白重链(Myosin heavy chain ，MYH) 的结构 ADP 释放能量，为肌肉收缩提供动力而影响运动、 分为头区和尾区。常规MYH 的N 端头区通常与 1 个 摄食等活动，从而直接影响鱼类生长(Campion et al, 调节型肌球蛋白轻链(Regulatory myosin light chain ， 2012) 。MYH 也广泛存在于非肌细胞中，是细胞骨架 RLC)和 1 个必需轻链(Essential myosin light chain ， 的组成成分，参与细胞内的细胞器运动与有丝分裂， ELC)结合，折叠盘绕形成球状头部作为“马达”功 细胞外的吞噬、运动、受精和吸收等生理过程，充当 能区； 2 个MYH 的C 端棒状区盘绕形成卷曲螺旋， 非肌细胞生命活动的不同层次的调节者，包括细胞间的 并聚集成束，形成粗肌丝束主体。其中，头部“马达” 信号传递、细胞形状改变等较高级的调节(Sebé-Pedrós 功能区有 ATP 结合位点，可结合 ATP ，将其水解为 et al, 2014) 。 * 国家引智项目( 国家外