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Nrf2基因沉默对缺氧预处理骨髓间充质干细胞凋亡的影响 龙仙萍，邓文文，赵然尊，王冬梅，石蓓 （遵义医学院附属医院心内科，贵州，遵义，563003） 通信作者：石蓓，E-mail: shibei2147@163.com 基金项目：国家自然科学基金资助项目（NSFC；贵州省科学技术基金（黔科合J字号LKZ[2012] 29号）摘要 目的 探讨Nrf2基因对缺氧骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响，为干细胞移植治疗心肌梗死提供较为优良的种子细胞。方法 用沉默（siRNA）核因子E2相关因子2（Nrf2）的慢病毒载体（LV-GFP-siRNA-Nrf2）转染入大鼠MSCs（即GFP-LV-MSCsNrf2-/-，简称MSCsNrf2-/-），采用蛋白印迹法（Western blot）检测Nrf2基因RNA干扰（RNAi）前后的蛋白表达变化。实验沉默Nrf2的MSCs（简称MSCsNrf2-/缺氧组）和常态Nrf2的MSCs（简称MSCsNrf2+/-缺氧组）两个缺氧组，以常氧MSCs（简称MSCsNrf2+/-常氧组）作为对照组。采用Annexin V /7-AAD染色结合流式细胞术检测细胞凋亡，细胞免疫荧光检测凋亡蛋白caspase3的表达情况，（蛋白印迹）血红素加氧酶-1(HO-1)凋亡相关蛋白的表达情况。 结果 与MSCsNrf2+/-组相比， Nrf2被小的干涉RNA（siRNA）干扰后可在蛋白水平有效抑制Nrf2表达。流式细胞术结果显示：与常氧组，缺氧组细胞凋亡率显著增高（P值0.05）；而在缺氧环境中，MSCsNrf2-/-组细胞凋亡率较MSCsNrf2+/-组又显著增高（P值0.05），且MSCsNrf2-/-组中凋亡蛋白Caspase3表达也明显增加（P值0.05）；Nrf2核蛋白及其下游靶基因HO-1蛋白表达水平（P值0.05）MSCsNrf2-/-缺氧组上述基因的表达则显著降低（P值0.05），明显低于MSCsNrf2+/-缺氧组和MSCsNrf2+/-常氧组，（P值0.05）。除此外，MSCsNrf2-/-缺氧组抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著下降，而促凋亡蛋白Bax表达显著增加（P值0.05）。结论 沉默细胞中的Nrf2基因可显著降低干细胞对缺氧的耐受能力，进一步加速细胞凋亡。 关键词 心肌梗死；NF-E2相关因子2；siRNA；骨髓间充质干细胞；细胞凋亡 The Effect of Nrf2 Gene Silencing on Apoptosis of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Simulated Inflammatory Environment in Vitro LONG Xian-ping，DENG Wen-wen，ZHAO Ran-zun ，WANG Dong-mei，SHI Bei Department of Cardiology, the First Affiliated Hospital of Zunyi Medical Universtiy, Guizhou Zunyi 563000 Abstract Objective To investigate the impact of Nrf2 gene silencing on apoptosis of bone marrow mesenchymal stem cells in hypoxic preconditioning , so as to provide better seed cells for stem cells transplantation in the treatment of myocardial infarction. Methods Nrf2 gene-specific siRNA was transfected into the rat bone marrow mesenchymal stem cells by taking the lentivirus as the vector. The changes in the protein expression before and after the Nrf2 gene RNAi were detected using Western blot. The hypoxic-ischemic cell models were prepared to simulate the myocardial infarction (MI) inflammatory environment, and the experiment was divided into four groups: GFP-LV-MSCsNrf2+