细菌麦芽糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的诱导型异源表达 - 微生物所期刊 .pdfVIP

微生物学通报 Feb. 20, 2017, 44(2): 263−273 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160102 研究报告 细菌麦芽糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的诱导型异源表达 杨韵霏 1,2 李由然 1,2 张梁 1,2 李赢 1,2 顾正华 1,2 丁重阳 1,2 石贵阳 1,2* (1. 214122) (2. 214122) 摘 要：【目的】实现地衣芽孢杆菌麦芽糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的高效异源表达，并研究该 重组酶的酶学性质。【方法】克隆巨大芽孢杆菌木糖异构酶基因的启动子区域及其调控蛋白，构 建一个大肠杆菌/ 芽孢杆菌穿梭型诱导表达质粒，使用该诱导型启动子介导麦芽糖淀粉酶编码基 因，实现其在枯草芽孢杆菌中的功能表达。对重组枯草芽孢杆菌的诱导条件进行优化，提高麦芽 糖淀粉酶的产量。【结果】获得了诱导表达麦芽糖淀粉酶基因的重组枯草芽孢杆菌菌株。最适诱 导温度为45 °C ，最适诱导剂添加浓度为1%，最适添加诱导剂时间为接种培养9 h 后。重组酶蛋 白分子量大小为67 kD ，对该酶的酶学性质研究发现，以可溶性淀粉为底物，反应生成麦芽糖和 2+ 葡萄糖，其中麦芽糖含量为60.42%。重组酶最适作用温度为45 °C ，最适作用pH 为6.5 ，Ca 、 Co2+ 、EDTA 对该重组麦芽糖淀粉酶具有激活作用。【结论】通过木糖诱导表达系统可以实现麦 芽糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的高效诱导型表达，酶活最高可达296.64 U/mL 发酵液，在工业上 有着较好的应用前景。 关键词：枯草芽孢杆菌，麦芽糖淀粉酶，木糖诱导启动子，诱导条件，酶学性质 Inducible heterogenous expression of bacterial maltogenic amylase in Bacillus subtilis YANG Yun-Fei1,2 LI You-Ran1,2 ZHANG Liang1,2 LI Ying1,2 GU Zheng-Hua1,2 DING Zhong-Yang1,2 SHI Gui-Yang1,2* (1. National Engineering Laboratory for Cereal Fermentation Technology, Wuxi, Jiangsu 214122, China) (2. School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China) Abstract: [Objective] To achieve the efficient heterogenous expression of a bacterial maltogenic amylase in Bacillus subtilis and investigate the characterization of the recombinant enzyme. [Methods] We cloned the genes of xylose isomerase promoter region and its regulatory