9型腺相关病毒介导的肌浆网钙atp酶基因三种方法转导.docVIP

同一滴度不同方法转染AAV9-SERCA2a基因对大鼠的有效性和毒副作用评价 徐晓霞，周祁娜，姜涛，王红丽，王欢，季萌，王凌鹏，张广伟，侯月梅 （新疆医科大学第一附属医院心律失常VIP实验室，乌鲁木齐830054） 【摘要】目的 研究同一滴度不同心脏基因转染方法转染携带肌浆网钙ATP酶2a（sarcoplasmic reticulum Ca2+ATPase 2a,SERCA2a)基因的9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype9,AAV9)即AAV9-SERCA2a对SD大鼠心肌的有效性及对机体毒副作用的影响。方法 体外成功构建AAV9-SERCA2a-EGFP病毒载体系统，90只雄性SD大鼠随机分为尾静脉注射（Tail vein injection，TVI）组、心肌注射（Intramyocardial injection，IMI）组、心包腔注射（Intrapericardial injection，IPI）组，采用相应方法在体分别转染滴度1×1011 vg/mL AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP、NS各200μL。转染后30d，荧光显微镜下观察心肝肾组织绿色荧光表达情况，Western Blot检测SERCA2a基因在大鼠各组织的相对表达量，体表12导联心电图检测心律失常发生率，HE染色观察病理学变化，心脏彩色多普勒超声评价心功能，血液生化学指标检测肝肾功能。结果 三组左心室可见大量绿色荧光表达，IMI组荧光局限在注射点，三组肝肾组织均可见微弱荧光；三组心肌SERCA2a蛋白相对表达量显著高于肝肾（P0.01），TVI组和IMI组心肌SERCA2a蛋白相对表达量明显高于IPI组（P0.01）；TVI组和IPI组心电图正常，IMI组2只大鼠发生室性早搏；三组转染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP与转染NS相比，心功能、组织病理学、血液生化学指标均无显著差异（P0.05）。结论 三种方法转染滴度1×1011 vg/mL AAV9-SERCA2a基因，TVI法和IMI法在心肌的有效性优于IPI法，TVI法和IPI法对机体的毒副作用小于IMI法，综合三种方法的有效性和毒副作用评价，TVI法优于IMI法和IPI法。 【关键词】转基因，有效，毒副作用 Evaluation of the efficiency and toxicity of AAV9-SERCA2a gene transfected by different cardiac gene delivery methods at the same titer in rats XU Xiao-xia, ZHOU Qi-na, JIANG Tao, WANG Hong-li, WANG Huan, JI Meng, WANG Ling-peng, ZHANG Guang-wei, HOU Yue-mei (Department of arrhythmia, The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054,China) 【Abstract】Objective To assess the efficiency and toxicity of adeno-associated virus serotype 9 (AAV9) mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ATPase 2a (SERCA2a) gene transferring to myocardium in SD rats by different cardiac gene delivery methods. Methods The AAV9-SERCA2a-EGFP virus victor system was constructed in vitro successfully. According to the three cardiac gene delivery methods, 90 normal SD rats were randomly divided into three groups: TVI (Tail vein injection，TVI)group, IMI（Intramyocardial injection，IMI）group, and IPI (Intrapericardial injection，IPI)group. Each group was respectively transferred with AAV9-SERCA2a-EGFP, AAV9-EGFP, NS 200μL