高效液相色谱荧光检测法测定人血清中胆汁酸含量.pdfVIP

分析测试学报 　　第 16 卷第 5 期 　　1997. 9. 25 ( ) 18 FENXI CESHI XU EBAO Journal of Instrumental Analysis 高效液相色谱荧光检测法测定人 血清中胆汁酸含量 汪海林　冯埃生　邹汉法 　李瑞江　张　津　赵瑞环　张玉奎 ( 中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心 　大连 　116011) β 摘 　要 　应用反相高效液相色谱 - 荧光检测技术 ,发展了人血清中 14 种胆汁酸分析的新方法 ,流动相中加入 环糊精作为添加剂 ,等度冲洗 ,一次分析可在 60 min 内完成,且可以达到基线分离。由于胆汁酸的紫外吸收弱 ,采 用 4 - 溴甲基 - 7 - 甲氧基香豆素作为荧光试剂衍生。激发波长320 nm ,发射波长 380 nm 。血清样品经预处理, 回 收率介于 66 0 %～91 6 %之间。在 0 025～15 mg/ L 质量浓度范围 ,色谱峰面积对浓度作线性回归分析 , 回归系 数介于 0 9908～0 9986 之间。方法快速、简单、灵敏度高。 关键词 : 胆汁酸 ,β- 环糊精 ,荧光检测 ,高效液相色谱。 　　胆汁酸由于其独特的物理化学性质 ,对胆固醇的平衡、脂肪的消化和呼吸及胆结石的形成起着关键作用。 血清、胃肠液、肝和胆囊中的胆汁、尿液、粪便中胆汁酸的测定 ,可为肝胆疾病、胃肠消化功能紊乱及脂肪代谢紊 乱的诊断提供可靠依据 ,因而胆汁酸的测定 ,尤其是血清中胆汁酸的测定越来越受到人们的重视[ 1 ] ,在临床上 对肝胆疾病检查的灵敏度高于 96 % ,特异性大于 98 %[ 2 ] 。 血清中胆汁酸含量低 ,无法直接利用紫外检测。赵瑞环等[ 3 ] 曾利用 RPHPLC 及柱后酶反应衍生荧光检 测方法分析了血清中胆汁酸。柱后酶反应衍生荧光检测方法要求在高效液相色谱柱后增加一酶柱 , 降低了色 谱柱的分离效能 , 同时对分离条件有严格要求。本文采用柱前荧光衍生 ,流动相中加入 β - 环糊精 ,可在 60 ( ) min 内完成 10 种胆汁酸的分析 自由型5 种、甘氨型 5 种 。牛磺型胆汁酸不能直接与4 - 溴甲基 - 7 - 甲氧基 香豆素发生衍生反应 ,因此须将它们从衍生溶液中通过固相萃取抽提出来 ,通过胆酰甘氨酸水解酶水解转化成 自由型胆汁酸进行衍生反应后分析。 1 实 验 部 分 11 　试 　剂 ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 胆酸 CA 、熊脱氧胆酸 UDCA 、鹅脱氧胆酸 CDCA 、脱氧胆酸 DCA 、石胆酸 LCA 、甘氨胆酸 GCA 、 ( ) ( ) ( ) ( ) 甘氨熊脱氧胆酸 GUDCA 、甘氨鹅脱氧胆酸 GCDCA 、甘氨脱氧胆酸 GDCA 、甘氨石胆酸 GLCA 、牛磺胆酸 ( ) ( ) ( ) ( ) ( )