一、毛细管电泳简介 - 国立交通大学机构典藏.pdf

一、毛細管電泳簡介 1.1 、毛細管電泳的簡介 電泳的分離是利用帶電分析物在緩衝溶液中，外加高電壓時，分 析物會以不同的移動速率向電荷相反的方向遷移，造成分析物分離的 現象。1937 年，Tiselius[1]率先將電泳技術發展成一種分離技術，並 成功地利用電泳技術分離人體血清中的球蛋白，由於此研究與貢獻， Tiselius 於 1948 獲得了諾貝爾化學獎。1967 年，Hjerten [2]提出以直 徑 3mm 的開管毛細管管柱，在高電場之下進行毛細管區帶電泳 (Capillary Zone Elecrophoresis ，CZE) ，造成無機離子、蛋白質與核酸 的分離。1974 年，Virtamen[3]採用了內徑 200~500um 的玻璃毛細管 柱進行電泳實驗，並針對電滲流與焦耳熱對散熱及分離效率的影響加 以探討。1981 年，Jorgenson 與Lukacs[4-5]以75µm 內徑的毛細管在 高電場下進行一系列胺基酸的分離，而開啟了毛細管電泳的應用。 1984 年，Terabe[6] 提出了微胞電動力學毛細管層析法(Micellar Electrokinetic Capillary Chromaqtography ，MEKC) ，可用來分離中性 物質，不再侷限於帶電分析物 ，因而提昇毛細管電泳的應用範圍。 毛細管電泳因內徑小，管壁內表面積對體積的比值高，使得散熱 快，可降低高電場引起的焦耳熱效應，改善了傳統電泳在高電壓分離 時，因焦耳熱效應，而無法獲得好的分離效果的缺點。相較於高效液 相層析(HPLC) ，毛細管電泳的分離效率較高，分析速度快，所需樣 品量少及溶劑消耗量少的優點。分離不同性質的分析物，僅需改變操 作模式、緩衝溶液的組成與操作條件，即可分離不同的樣品，因此毛 細管電泳具有很大的選擇性。此外，毛細管電泳因結合了電泳的分離 機制、色層分析儀器及自動化的分離技術，所以具有線上檢測、定量 分析和儀器自動化的特點，使得毛細管電泳迅速成為極有潛力的分離 1 技術。現今商業型毛細管電泳儀主要可分為高電壓供給器、白金電 極、分離之毛細管、緩衝溶液、偵測器及訊號處理器等部份，儀器裝 置簡圖如圖 1 所示。樣品由毛細管一端注入，然後將毛細管兩端分別 置於緩衝溶液中，再藉由白金電極將高電壓導入緩衝溶液形成外加電 場，使分析物因遷移速率不同而分離，最後經由偵測器檢測。 1.2 毛細管電泳分離原理 毛細管電泳的分離原理是利用分析物在緩衝溶液中解離成不同 電性、不同電荷數之離子，在施加電場作用下，依照分析物本身之遷 移速度而形成分離。在緩衝溶液中，中性分析物不受外加電場影響， 分析物遷移速度與電滲流相同，故無法造成分離效果，所以調節緩衝 溶液使分析物帶不同電性，是重要的考量因素。毛細管管柱為 fused silica 材質，當毛細管管柱注入pH 值大於2 的緩衝溶液時，內部管壁 表面的silanol group 會開始解離而帶負電荷，此時緩衝溶液中的陽離 子因受管壁上之負電荷吸引而在管壁表面形成電雙層，在外加電場作 用下，電雙層中擴散層的水合陽離子會帶著管柱中的溶液往負電極流 動，形成電滲流。電滲流因受外加電場作用而形成，其移動型式為「平 板流(plane flow) 」，而非如高效液相層析分析方法由壓力驅動所產生 之「拋物線流」，故分析物利用毛細管電泳分離時，在毛細管中的樣 品區間可更為集中，分離的理論板數因此提高。若毛細管內壁經過修 飾而帶有正電荷時，則電滲流的方向為由負極往正極；若管壁不帶電 荷或為電中性時，則無電滲流的產生。由 von Smoluchowski 所推演 的公式(1)可清楚看出電滲流速度與電場強度成正比的關係，另和介電 常數、則塔電位及溶液黏度也有密切的關連。 εε ζΕ ν µ Ε 0 (1) eo eo η 2 ν ：電滲流速度(velocity of electroosmotic flow) eo µeo ：電滲流移動率(mobility of electroosmotic flow) E ：電場強度(electric field s