循环内皮祖细胞与骨髓源性内皮祖细胞.doc

糖尿病对外周血循环内皮祖细胞的影响 程千鹏　综述　　　　吕肖锋　审校 　　　　　　　　　　　北京军区总医院内分泌科　　100700 摘要 关键词　动脉粥样硬化EPCs和晚期OECs (late outgrowth endothelial cells)两类，且OECs直接参加血管的修复和新生血管的形成，而早期EPCs则以旁分泌的形式进行[3]。由于体外分离获得的EPCs数量太少,并且衰老、疾病等因素可以降低其增殖能力,所以如何体外培养获得高增殖性EPCs成为急需解决的一个问题。 二、糖尿病外周血循环EPCs的变化及机制 (一)、 糖尿病外周血循环EPCs的变化　　DM时外周血EPC数量明显下降,其增殖能力减弱,寿命缩短,迁移能力明显降低。Fadini报道[4],与正常对照比,T2DM病人外周血中EPCs数目平均降低约40%。在24例伴周围血管病的DM病人、16例不伴周围血管病的DM病人、11例伴周围血管病的对照者和17例无周围血管病的对照者中的测定结果发现,与各组相比,伴周围血管病的DM病人外周血EPCs减少最明显(P0.05),而且与血糖浓度呈明显负相关,与各种心血管危险因素呈明显负相关。Fadini等[14]在对下肢缺血再灌注的糖尿病鼠模型的研究中发现EPC不能被有效动员。 糖尿病时高血糖及胰岛素抵抗使内皮功能受损，但内皮祖细胞数量和功能也大大降低，不能对受损内皮及时修复，甚至有研究显示糖尿病时机体对骨髓源性内皮祖细胞动员能力也大大减弱。Fadini等在127例伴或不伴周围血管病变的糖尿病病人研究中发现：1.伴周围血管病变的糖尿病病人内皮祖细胞减少53%；2. 伴周围血管病变的糖尿病病人内皮祖细胞克隆和黏附能力明显降低[5]。因此，Fadini等认为内皮祖细胞的数目和功能是糖尿病周围血管并发症的标志。 (二)、发生机制 　以往的研究证实,在急性心肌梗死和急性冠状动脉综合征缺血缺氧的刺激下以及各种促血管新生因子(生长因子)作用下,EPCs从骨髓大量进入周围血,外周血中EPCs数目明显增加[6],但在1型或T2DM时外周血循环EPCs数目明显减少,功能明显障碍。糖尿病时，导致外周血循环内皮祖细胞数目减少，功能障碍的因素很多，但高血糖，氧化应激发挥主要作用。 1.高糖对外周血循环内皮祖细胞影响　　Scheubel[7]等分析在2，20，200microg/ml晚期糖基化终末化产物（Advanced glycation endproducts，AGEs）环境下萌芽生长长度(Sprout length growth)和CD34细胞合并入萌芽(incorporation of CD34 cells into the sprouts)。应用spheroid测定法发现, AGEs浓度依赖导致萌芽生长长度减少从6+/-6到32+/-6%，而且祖细胞合并入内皮组织萌芽能力减弱达到43+/-6%。这一机能的损伤伴随着AGEs低浓度(2或20microg/ml)时CD34细胞细胞增殖的激活和高浓度时凋亡的激活。Kuki[8]等发现高血糖通过P38细胞分裂素(丝裂原)活化蛋白激酶的激活而促进内皮祖细胞的衰老、凋亡。他们用从人外周血中分离出EPCs，并通过酸性β-半乳糖苷酶（acidic beta-galactosidase）染色来评价受葡萄糖(5-12.5 mmol/L)影响的EPCs凋亡率。p38有丝分裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的水平用ELISA进行分析。通过十天的培养和相同渗透压的对照组相比，暴露在高糖环境下，EPC的衰老比率显著增加。和对照组相比，EPCs 的p38 MAPK的磷酸化增加，呈葡萄糖剂量依赖表现，而且这种高糖诱导的内皮祖细胞衰老通过加入p38 MAPK的抑制剂SB203580可以被显著的抑制。Yung-Hsiang等[9]用分离来自健康受试者的单核细胞在高糖或甘露醇环境下进行培养，经过四天的培养得到早期EPCs，经过2-4周的培养得到大鹅卵石样的单层晚期内皮祖细胞，并进行内皮祖细胞衰老测定，eNOS活力测定以及晚期EPCs移行和血管生成能力的测定。和5 mmol/l相比在20，25 mmol/l葡萄糖中培养所得早期EPCs数目减少26.4%和33.6%，增殖能力降低19.1%和28.3%。与对照组相比，25 mmol/l高糖环境培养的早，晚期EPCs中衰老的EPCs都显著增多，VEGF诱导的晚期EPCs的迁移能力降低37%。内皮祖细胞在高糖环境培养四天后Akt和FoxO1磷酸化明显减低，加入NO供体硝普钠或者 p38 MAPK抑制剂SB230580能显著改善高糖的抑制作用；相反，加入NOS 抑制剂L-NAME或者PI3