TGF-β1siRNA对膀胱肿瘤血管生成的作用.pdf

递趔医堂睦亟±堂焦迨塞 目 录 1 TGF．B 1siRNA对膀胱肿瘤血管生成的影响………………1 1．1 中文摘要………………………………………………………1 1．2 英文摘要………………………………………………………3 1．3 前言……………………………………………………………5 1．4 材料与方法……………………………………………………7 1．5 结果……………………………………………………………29 1．6 讨论……………………………………………………………31 1．7 结论……………………………………………………………35 1．8 参考文献………………………………………………………36 1．9 英汉缩略词对照表……………………………………………40 2 致谢……………………………………………………………41 3 TGF．B 1信号传导通路与膀胱癌关系的研究进展(综述) 12I16IIoII12U13I1III攀 TGF—B1Si RNA对膀胱肿瘤血管生成的影响 摘 要 膀胱肿瘤是临床上最常见的一种泌尿系统肿瘤，而且也是一种威胁患 者生命的疾病。膀胱癌的生物学行为特别复杂，主要变现为：复发、多发、 浸润和转移等。90％的膀胱癌是尿路上皮癌，且具有高复发性率。膀胱癌的 发生、发展及复发机制目前尚不明了，近年来随着相关研究的深入，发现 factors 转化生长因子Bl(Transforminggrowth B1，TGF—D1)能促 进肿瘤血管的生成从而导致癌细胞的扩散转移。目的：探讨通过选择人工 siRNA转染入人膀胱癌细胞株进行培养， 设计合成抑制作用最佳的TGF．B1 来明确TGF．plsiRNA对膀胱肿瘤血管生成的影响。方法：将膀胱癌细胞株 进行培养，取对数生长期的膀胱癌细胞分为常规细胞组、脂质体组(阴性 IsiRNA表达载体组。 对照组)和3组(A组、B组和C组)含不同TGF-B siRNA，通过质粒分别转染入A组、B 选择人工设计合成好的三种TGF．p1 组和C组后，转染细胞培养24小时后使用实时荧光定量聚合酶链式反应 (real—time 取对数生长期的膀胱癌细胞进行转染，将膀胱癌细胞分为EJ肿瘤细胞组、 IsiRNA表达载体组)。对照组 对照组(TGF—Bl组)、重组质粒组(TGF—B TGF—B 采用lOng／ml l刺激，转染细胞培养24小时后应用蛋白印迹法 (Western 管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果：人膀胱癌细胞株培养良 好，TGF—B lmRNA在转染空白质粒的EJ细胞组内的表达无统计学意义 比较，TGF—B lmRNA的表达无明显干扰；与常 (PO．05)，表明转染的空白质粒对TGF-B 1 SiRNA组 ImRNA在三个不同TGF—B 规细胞组和空白质粒组比较，TGF—B 进趟医堂睦亟±堂僮途塞 l SiRNA对TGF-plmRNA的表达均具有抑制作用， 明所设计的三种TGF一13 1 SiRNA序列与其他序列比较具有最佳抑制效果。Elisa检 其中C组TGF一13