剖析第三章 动植物细胞培.pptVIP

2、抗体结合位点化学修饰法： 抗体酶和酶一样也可以用化学修饰法加以改造。对抗体酶进行结构修饰的关键是找到一种温和的方法在抗体结合位置或附近引入具有催化功能的基因。游离巯基就是适合的基团之一，它具有高亲核性，易于氧化，及能通过二硫化物进行交换反应或亲电反应而选择性修饰的特点。 * 三、抗体酶的应用 1.戒毒:  用可卡因水解的过渡态类似物-磷酸单酯为半抗原，产生的单克隆抗体能催化可卡因的分解，水解后的可卡因片断失去可卡因刺激功能。 * 2.肿瘤治疗 抗体介导前药治疗技术:将能水解前药释放出肿瘤细胞毒剂的酶和肿瘤专一性抗体相偶联，则酶通过和肿瘤结合的抗体存在于细胞的表面。静脉给药后，当药物扩散至肿瘤细胞的表面或附近，抗体酶将前药迅速水解释放出抗肿瘤药物。 * * * * * * * * * * * * * 第三章 动、植物细胞培养产酶 定义：动、植物细胞培养是通过特定技术获得优良的动、植物细胞，然后在人工控制条件的反应器中进行细胞培养，以获得所需产物的过程。 * 一、动植物细胞中酶生物合成的调节 1.细胞分化改变酶的生物合成（如端粒酶） 2.基因扩增加速酶的合成 3.增强子促进酶的生物合成 4.抗原诱导抗体酶的生物合成 * 二、植物细胞培养产酶 与微生物细胞相比，动物细胞和植物细胞 具有各自不同的特性，需采用各自不同的 培养工艺。 1.植物细胞的特性 * 植物、动物、微生物细胞的特性比较 细胞种类 植物细胞 微生物细胞 动物细胞 细胞大小/um 200～300 1～10 10～100 倍增时间/h ﹥12 0.3-6 ﹥15 营养要求 简单 简单 复杂 光照要求 大多数要求 不要求 不要求 对剪切力 敏感 大多数不敏感 非常敏感 主要产物 色素、药物、香精、酶等 醇、有机酸、氨基酸、抗生素、核苷酸、酶等 疫苗、激素、单克隆抗体、酶等 * 2.培养基特点 应用最广的是MS培养基和LS培养基 常用的MS培养基和B5培养基的组成列于P73表3-3 * 3.培养工艺：——悬浮细胞培养 ⑴工艺流程 外植体→细胞的获取→细胞培养→分离→纯化产物 ①外植体选择和处理 选取那些无病虫害、生长旺盛、生长规则植株，把茎、叶、根、芽，花、果实等切成小片段或小块。用70%-75%乙醇，0.1%升汞消毒，无菌水漂洗。 * 外植体： 从植株取出，经过预处理后，用于植物组织培养的植物组织（包括根、茎、叶、芽、花、果实、种子等）的片段或小块。 愈伤组织： 将上述外植体植入诱导培养基中，于25℃左右培养一段时间，从外植体的切口部位长出小细胞团。 * 水稻的外植体（幼胚）和愈伤组织 外植体 愈伤组织 * ②植物细胞获取 直接分离法 愈伤组织诱导法 原生质体再生法 ③细胞悬浮培养：转新培养基，在生物反应器中进行培养 ④分离纯化：生化技术 机械法 酶法 * ⑵ 培养条件的影响与控制 ①温度：室温25℃(有时需变温控制） ②pH：微酸性范围。即pH 5.0-6.0 ③溶解氧的调控：通气与搅拌 ④光照的控制：强度和时间有一定要求 ⑤前体的添加（饲喂） ⑥刺激剂的应用 * 4.植物细胞培养产酶实例 以大蒜细胞培养生产超氧化物歧化酶（SOD）为例 (1)大蒜愈伤组织的诱导 选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，去除外皮，先用70%乙醇消毒20s，再用0.1%升汞消毒10min，然后无菌水漂洗3次。 在无菌条件下，切成0.5cm3的小块，植入含有3mg/L 2,4-D（二氯苯氧乙酸）和1.2mg/L 6-BA（苄基腺嘌呤）的半固体MS培养基中，在25℃，600lux，12h/d光照条件下培养18d，诱导得到愈伤组织，每18天继代一次。 * (2)大蒜悬浮细胞培养 将上述在半固体MS培养基上培养18d的愈伤组织，在无菌条件下转入含有3mg/L 2,4-D和 1.2mg/L 6-BA 的液体MS培养基中，加入灭菌的玻璃珠，25℃，600lux，12h/d光照条件下震荡培养10-12d，使愈伤组织分散成为小细胞团或单细胞。 然后在无菌条件下，经过筛网将小细胞团或单细胞转入含有3mg/L 2,4-D和1.2mg/L 6-BA 的液体MS培养基中，25℃,600lux，12h/d光照条件下震荡培养18d。 * (3)酶的分离纯化 细胞培养完成后，收集细胞，经过细胞破碎、提取、分离得到超氧化物歧化酶。 * 三、动物细胞培养产酶 1.动物细胞培养的特点 动物细胞可以产生各种有效高价值的物质 需添加抗生素（常用青霉素和链霉素联合） 细胞生长速度慢 细胞体积大，无细胞壁保护，对剪切力敏感 反应过程成本高（P81），产品价格贵