血液中15N 标记氨基酸同位素丰度 - 分析化学.PDF

第43卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 特约来稿 第10期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015年10月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 1465~1471 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.150385 15 血液中 N标记氨基酸同位素丰度 1,2 1 *1, 2 雷雯 摇 侯捷摇 杜晓宁 摇 张维冰 1(上海稳定性同位素工程技术研究中心,上海化工研究院,上海200062) 2(化学与分子工程学院,华东理工大学,上海200237) 15 摘摇 要摇 以硅烷化试剂N鄄甲基鄄N鄄(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(MSTFA)对氨基酸加以衍生,建立了衍生化 N标 记丙氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和尿素同位素丰度的气相色谱鄄质谱联用检测方法。 在优化的色谱和质谱 条件下,5种衍生化物均得到基线分离。 通过对5种衍生化物的EI质谱图进行解析,选择合适的特征碎片离子 作为同位素丰度的计算依据,并采用同位素峰簇算法计算同位素丰度,实现了多种化合物同位素丰度同时测定。 15 以高丰度 N标记氨基酸和尿素对照品对方法进行验证,方法的精密度优于0.15%,同位素丰度相对偏差小于 15 1.4%。 本方法已成功用于测定动物血液中 N标记的4种氨基酸和尿素的同位素丰度。 关键词摇 同位素丰度;氨基酸;气相色谱鄄质谱联用;氮同位素标记 1摇 引摇 言 [1] 在生物医学领域,稳定同位素标记氨基酸常作为示踪剂对生物体的新陈代谢 进行表达或用于蛋白 [2] [3] 15 15 质合成率 的测定,同时也被用于蛋白质定量组学 。 通过将标记的氨基酸如甘氨酸鄄 N、丙氨酸鄄 N、谷 15 氨酸鄄 N等经静脉注射入生物体内,通过测定血液、尿液或组织样品中同位素丰度则可计算出蛋白质的更 15 新率、合成率和分解率等,而尿素是代谢过程中的最终产物,因而监测尿素鄄 N 的同位素丰度也可提供相 2 应的代谢信息。 《Cell》杂志近期报道了以同位素标记的谷氨酰胺和葡萄糖作为示踪剂,得到在MYC癌基