酵母菌中质粒DNA的检测 - 遗传.PDF

遗传 HEREDITAS(Beijing) 6(2);1-21984 研究报告 酵母菌中质粒DNA的检测 沈一雨唐 鹰1)姜伟东1)林琴斐2）李加2)唐 情 杭（ 州大 学 生物 系） 近年来酵母质粒作为基因工程的载体已获 二（）酵母细胞的培养及原生质体的制备 得明显的成就41。因此，开展对酵母质粒的检测 参照文献 【3］进行。 以及深人研究其结构与功能，将有重要意义。 三（）酵母总DNA的提取 参考Cryer 目前，质粒在啤酒酵母 S（accharomyces 等133方法并加以改进。将1g原生质体悬浮于 cerevisiae）中研究较多，含有质粒的和不含质粒 lml0.15M NaCl-0.1M EDTA 中，加0.2ml 的大约各占一半。在意大利酵母 S（accharomyces 10多SDS，使原生质体彻底裂解，再加5M italicus)、粟酒裂殖酵母 S（chizosaccharomyces NaC10。至最终浓度为1m，随即加等体积氯 pombe）以及乳酸克鲁维酵母 K（luyreromyces 仿一异戊醇 (24:1),搅匀，离心 4（,000转20分 lactis）中也都找到了DNA质粒I3.1982年龚启 钟），取水相，再重复抽提2次，1ml清液中加 蕙等21『报道了啤酒酵母7209-1A中质粒DNA 牛胰 RNase 溶（于重蒸水，100℃ 水浴处理15 的结构。 分钟）0.1mg,37℃保温1小时后再加氯仿一异 我们用简易的氯仿一异戊醇抽提法对不同 戊醇抽提2次，清液中加2M NaCl至最终浓 种属的酵母菌进行了质粒 DNA的检测。在尚 度为0.2M，接着加2倍体积冷乙醇，在一200C 未见报道的不同种属的酵母菌中，也找到了质 冰箱放置过夜，离心，沉淀用适量 10mM Tris- 粒DNA的存在。现将初步结果报告如下。 5mM EDTA-0.15M NaCl(pH7.5)溶解，得 到总DNA溶液。 材 料 与 方 法 （四）用酸酚法纯化酵母质粒DNA 一（）材料 参照文献[91进行。 1．菌株 SaccharomycescerevisiaeA364A, 五（）用限制性内切酶酶解质粒DNA 由中国科学院上海细胞生物所供给；Saccharo- 酶解反应液含有：100mMTris-HCI(pH7.5)- mycescerevisiae7209-1A,Saccharomycescerevi- IOMM Mgcl,。 取DNA约 1zjg，加人适量 siae2.1168、Saccharomycescerevisiae2.982,Sac- EcoRI酶或 PSII酶，反应总体积为30zI1，于 charomyceswillianussaccardo2.119，由中国科 37℃水浴中酶解1小时，然后在65℃水浴中保 学院微生物所供给；Saccharomyces二，isiaeY,a, 温5分钟，将限制酶灭活后，进行电泳鉴定。 CandidaarboreaY,5、强发酵度酵母 Y,(Logos 六（）0.7 琼脂糖凝胶电泳 参照文献 yeaso，由上海工业微生物所供给；美国面包酵 [5］进行。 母Y,，由广东甘化厂供给。 结 果 与 讨 论 2．培养基 为麦芽汁培养基，取新鲜麦 芽汁，用蒸馏水调至60波（美度）。 酵母菌的 DNA体系中包含3大类物质： 3.酶 蜗牛酶，由中国科学院生物物理 所制备。牛胰核糖核酸酶、EcoRI酶、Pstl酶， ShenYryuetal.:AssayofPlasmidDNAofYeast 1)1978级参加毕业实践学生。 均由上海东风生化试剂厂生产。