酵母表面展示T 载体构建及目的蛋白的表面展示.PDF

18 卷 6 期 生命科学研究 灾燥造援员8 晕燥援6 圆园14 年 12 月 蕴蚤枣藻杂糟蚤藻灶糟藻 砸藻泽藻葬则糟澡 Dec. 圆园14 酵母表面展示T 载体构建及目的蛋白的表面展示 a b a a b a* 秀怡, 志成, 朱 筱, 刘诗雨, 张 智, 田生礼 ( 圳大学生命科学学院 a. 圳市微生物基因工程重点实验室; b. 圳市海洋生物资源与生态环境重点 实验室, 中国广东 深圳 518060) 摘 要: 构建一种能对PCR 产物进行直接克隆并展示于酵母表面的新型T 载体 根据酵母表面展示载体 pYD1 多克隆位点序列设计出利用两端带有X cm 内切酶酶切位点的含有黄色荧光蛋白基因的X cm 酶切 盒, 通过Nhe 和X ho 酶切位点插入到pYD1 载体上形成质粒pYD-YFP, 并对其进行酶切鉴定和DNA 测 序分析, 再经X cm 酶切后形成两端带有dT 的表面展示T 载体 利用PCR 扩增两个含有荧光蛋白的融合蛋 白PCAD-CFP 和PSR-DsRed 的基因并直接克隆到所构建的栽载体 , 检测其表达功能 酶切鉴定和DNA 测 序结果显示PCA D-CFP 和PSR -DsRed 正确插入载体上, 分别转化至酿酒酵母EBY 100 , 激光共聚焦显微镜 下观察到相应的荧光的酵母, 表明克隆有融合蛋白基因片段的载体成功在酵母细胞 进行表面展示, 证明了 所构建的酵母表面展示T 载体具有直接克隆和表面展示目的蛋白的功能 关键词: T 载体; 酵母表面展示; 真核表达; X cm 酶切盒 中图分类号: Q782 文献标识码: A 文章编号 1007-7847 渊2014 冤06-0477-06 Construction of a Yeast Surface T-vector and Display of Interested Proteins on Yeast Cell Surface a b a a LIANG Xiu-yi , LIANG Zhi-cheng , ZHU Xiao , LIU Shi-yu , b a* ZHANG Zhi , TIAN Sheng-li (a. Shenz hen K ey Laboratory of Microbial Genetic Engineering; b. Shenz hen K ey Laboratory of Marine Bioresources and Ecology, College of L ife Sciences, Shenz hen Unive rs ity, Shenz hen 518060, Guangdong, China) Abstract ：We have constructed a T-vector to directly clone PCR pro