附录V A 紫外-可见分光光度法.PDF

附录V A 紫外-可见分光光度法 仪器的校正和检定 1.波长 由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应 定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较 强谱线 237.83nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm，334.15nm，365.02nm， 404.66nm ，435.83nm ，546.07nm 与 576.96nm ；或用仪器中氘灯的 486.02nm 与 656.10nm 谱线进行校正；钬玻璃在波长 279.4nm ，287.5nm，333.7nm，360.9nm， 418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm 与 637.5nm 处有尖锐吸收峰，也可作波长校 正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意；近年来，常使 用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以 10％的高氯酸为溶剂，配制含4 ％氧化钬（Ho O ） 2 3 的溶液，该溶液的吸收峰波长为 241.13nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm， 361.31nm，416.28nm ，451.30nm ，485.29nm ，536.64nm 和 640.52nm 。 仪器波长的允许误差为：紫外区±1nm，500nm 处±2nm ，700nm 处±4.8nm 。 2.吸光度的准确度 可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在 120℃干燥至恒重的基准 重铬酸钾约 60mg，精密称定，用 0.005mol/L 硫酸溶液溶解并稀释至 1000ml，在规定 的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。 波长/nm 235 （最小） 257 （最大） 313 （最小） 350 （最大） 吸收系数（E1% ）的规定值 124.5 144.0 48.6 106.6 1cm 吸收系数（E 1% ）的许可范围 123.0～ 142. 8～ 1cm 47.0～50.3 105.5～108.5 126.0 146.2 3.杂散光的检查 可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置 1cm 石英吸收 池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。 试剂 浓度/% （g/ml ） 测定用波长/nm 透光率/% 碘化钠 1.00 220 ＜0.8 亚硝酸钠 5.00 340 ＜0.8 对溶剂的要求 1 含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它 们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为 205nm 。另 外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶 剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置 1cm 石英吸收池中，以空气为 空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度，在 220～ 240nm 范围内不得超过 0.40 ，在241～250nm 范围内不得超过 0.20 ，在251～300nm 范 围内不得超过0.10，在 300nm 以上时不得超过0.05 。 测定法 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用 1cm 的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm 以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定 波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除另有规定外，吸 收峰波