氨基酸对映体的.pdfVIP

氨基酸对映体的 氨基酸对映体的 手性拆分 手性拆分 报告人：袁培培 一．概述 二. （DL-HPG ）拆分方法 一) 分离方法 1. 色谱法 2. 毛细管电泳法 3. 酶法 4. 诱导结晶法 二）分离机理 1. 间接法 2. 直接法 1. 诱导结晶法 2. 酶法 色谱法可分为高效液相色谱（HPLC ）、 薄层色谱法（TLC ）和气相色谱法 （GC ）。具有高效能、选择性好、灵 敏度高、操作简单等特点。氨基酸对映 体在色谱分离前通常需要进行衍生化， 衍生化的氨基酸对映体更适合于色谱分 离，而且还能提高样品的检测灵敏度。 毛细管电泳是近年来发展起来的一种新的分析技 术，其特点是分离效率高（理论塔板数 105～ 6 -19 -21 10 ）、灵敏度高（可达10 ～10 mol ）、应用 范围广（从生物大分子到小分子、离子）、分析 时间短（一般数分钟）、需要样品体积小（1～ 50nl ）、分离模式多。目前常用的手性氨基酸分 析模式为毛细管区带电泳（CZE ）和胶束电动色 谱（MEKC ）。 a ）酶法具有选择性好,收率高,反应条件温和,步骤简便, 公害少且 能完成一些化学这方法难以进行的反应等 优点，已成为制备手性氨基酸的有效手段之一。 b ）其原理如下:外消旋氨基酸先生成其衍生物如外消旋 酯、酰胺,然后被酶或微生物选择性水解成旋光纯氨 基酸,再通过常规化学物理方法从反应混合物中分离。 c ）酶法拆分中常用酶有脂肪酶、酯酶、蛋白酶等水解 酶。水解酶价格低廉,不需辅酶,拆分率和立体选择性 高。由于底物、反应条件和所用酶的不同,拆分率有 较大差别。 a ）诱导结晶法是最经济的拆分方法,不需借助其他物 质,也不须转化成氨基酸衍生物。 b ）其原理是利用氨基酸的旋光异构体在一定温度时 较外消旋体溶解度小,易析出的性质,在外消旋体溶 液中加入某一种旋光异构体作为晶种,诱使与晶种 相同的异构体优先析出,借此达到分离目的。 c ）常用的拆分剂有手性酒石酸、樟脑磺酸、3-溴樟 脑磺酸及非手性拆分剂。 d ）该法适用范围窄,只有那些外消旋体的溶解度在相 同温度下是其光学异构体的2倍左右的物质才有可 能用诱导结晶法。 a ）采用间接法时，对映体首先与光学纯手性 化合物进行化学反应生成一对非对映立体异 构体，然后再进行分离。此种方法分离的时 衍生物而不是原对映体，可在非手性环境下 用色谱法分离。 b ）优点是采用非手性柱分离，通过衍生化可提 高检测灵敏度，分离条件简单，效果好。 c ）缺点是手性药物需要有高光学纯度的手性 试剂，对各对映体衍生化速率和平衡常数应 一致，衍生化和色谱分离过程中不能发生消 旋化。 手性流动相 直 接 Pirkle 手性固定相 法 纤维素手性固定相 手性固定相 包和手性固定相 配体交换手性固定相 蛋白质手性固定相 a ）直接法的分离原理是手性对映体之一与手 性固定相或流动相添加剂间发生分子间的 三点作用，同时另一对映体则发生两点作 用，形成非对映异构体的络合物，前者较 后者稳定，通过脱洗使两个对映异构体分离。 b ）优点是在分离前不需要进行衍生化反应，可 根据手性固定相合流动相选择不同溶剂体系 做流动相。