短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX功能物质羟苯乙酯生产发酵 - yzxzcom.PPT

短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX功能成分羟苯乙酯含量测定及发酵条件优化;结论与展望;尼泊金酯于上世纪20年代首次报道了其抗菌活性，1923年就被建议作为食品和药品的防腐剂。由于其毒性低，抑菌谱广，广泛应用于食品、医药、日用品、化妆品等许多领域。 尼泊金酯对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等。 其抑菌机理是破坏微生物的细胞膜，使细胞内的蛋白质变性，并抑。; 固相萃取是基于液相色谱理论的一种分离、纯化方法。自上世纪70年代后期问世以来，以其高效、可靠及耗用溶剂量少等优点，在环境、药物分析等许多领域得到了快速的发展。 根据所分析物与固相萃取填料的相互作用机制不同，可将固相萃取法分为三类：正相、反相和离子交换固相萃取。 操作一般有四步：固定相活化、上样、淋洗和洗脱。 ; HPLC是上世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分析分离技术。它是以液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。 广泛运用于有机化学、生化、医学、药物临床、化工、食品卫生、环境监测、商检和法检等方面，而在生物和高分子试样的分离和分析中更是独领风骚。 HPLC具有选择性高、分离效率高、灵敏度高、分离速度快的特点。;;;三、短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX功能成分羟苯乙酯的测定;1、流动相（甲醇-水）;标准品贮备液的出峰时间为2.77 min，峰面积为8323.1； 待测样品溶液出峰时间为2.79 min，峰面积为91；;1、流动相（甲醇-0.1%冰醋酸）;标准品贮备液的出峰时间为4.115min，峰面积为6943.6； 待测样品溶液出峰时间为4.113 min，峰面积为41.6；;标准品贮备液的出峰时间为3.065 min，峰面积为8381.3； 待测样品溶液出峰时间为3.054 min，峰面积为2.9；;1、流动相（乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾）;标准品贮备液的出峰时间为3.719min，峰面积为8491； 待测样品溶液出峰时间为3.73，峰面积为31.1；;标准品贮备液的出峰时间为2.97min，峰面积为9010.1； 待测样品溶液出峰时间为2.947，峰面积为38.6；;标准品贮备液的出峰时间为9.471min，峰面积为6168.9； 待测样品溶液未检测出羟苯乙酯样品的峰；;1、流动相（乙腈-0.005mol/L醋酸铵）;标准品贮备液的出峰时间为3.718 min，峰面积为8368.3； 待测样品溶液出峰时间为3.758，峰面积为96.6；;标准品贮备液的出峰时间为2.97min，峰面积为9010.1； 待测样品溶液出峰时间为2.947，峰面积为38.6；;1、流动相（乙腈-水）;标准品贮备液的出峰时间为5.388min，峰面积为8155.7； 待测样品溶液出峰时间为5.423，峰面积为137.2；;标准品贮备液的出峰时间为3.747min，峰面积为7678.7； 待测样品溶液出峰时间为3.747，峰面积为43；;2、系统适应性研究;3、精密度试验;4、最低检测限度;5、稳定性研究;6、回收率试验;7、标准曲线绘制;8、短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX发酵液中羟苯乙酯含量的测定 ;1、单因素优化;固定碳源为DL-苹果酸，分别对8种不同的氮源进行尝试，根据标准曲线Y=81.031C-55.929，测算出羟苯乙酯含量，其中蛋白胨作为氮源时，羟苯乙酯含量达到4.58mg/mL。;分别对8种不同的无机盐进行尝试，根据标准曲线Y=81.031C-55.929，测算出羟苯乙酯含量，其中NaCl作为无机盐时，羟苯乙酯含量达到3.61mg/mL。;2、发酵主要影响因子的筛选;表中A、B、C、D、E、G、H分别代表温度、转速、豆饼粉、通气量、DL-苹果酸、蛋白胨、NaCl、接种量。根据标准曲线Y=81.031C-55.929，测算出羟苯乙酯含量。;豆饼粉（p=0.030）、DL-苹果酸（p=0.089）和NaCl（p=0.035）作为重要影响因子的可信度大于90%，对发酵液中羟苯乙酯的含量影响显著；其中DL-苹果酸、NaCl的浓度对羟苯乙酯的含量是正效应，豆饼粉浓度的影响是负效应。因此要提高产量，应适当减低豆饼粉的浓度，提高DL-苹果酸和NaCl的浓度。;3、最陡爬坡路径确定重要影响因子的最适浓度范围;4、响应面分析优化（RSM）培养基组成;; 二次响应面回归模型的建立;4、响应面分析优化（RSM）培养基组成;4、响应面分析优化（RSM）培养基组成;;;本研究率先建立了固相萃取小柱-高效液相色谱法测定该菌株发酵液中产生 的功能物质羟苯乙酯的含量测定体系。色谱条件为（色谱柱：C18；流动相，甲醇-水（65:35），流速：1.0mL/min，检测波长：254 nm，柱温：25 ℃，进样量：10 μL）