透明质酸钠的无菌检查.PDFVIP

透明质酸钠的无菌检查 曲建全 赵长美 李国凤 郭凤仙 随着研究的不断深入，透明质酸钠，在医药领域已经广泛应用，并具有较高 临床价值。 药用透明质酸钠用于配制注射剂时，必须进行无菌检查，以保证用药安全。 由于透明质酸钠的黏度大，不易溶解，结合中国药典无菌检查的有关规定，我们 [1~4] 进行了试验摸索，并提出解决方法 ，供参考。 1 实验仪器设备，用具，培养基及试剂 1.1 仪器设备 生化培养箱、100 级净化工作台、台式恒温水浴振荡器、天平 1.2 用具 三角瓶（500ml ）、试管（21 ×200 ）、硅胶塞、注射器和针头、称量勺、吸量 管，均需115℃，30 分钟高压灭菌后方可使用。 1.3 培养基 需气菌、厌气菌培养基 （硫乙醇酸盐流体培养基），中国药品生物检定所监 制，每个试管装15 ml，共需7 支。真菌培养基，每个试管装15 ml，共需5 支。 此两种培养基均需经115℃，30 分钟高压灭菌方可使用。 1.4 试剂 0.9%氯 钠溶液，玻璃酸酶（1500 单位/支）30 支，磷酸盐缓冲液（磷酸二 氢钠2.5 克，磷酸氢二钠 1.0 克，氯 钠8.2 克，加水使成 1000 ml ）301ml 装入 500 ml 三角瓶中作溶解用水，除玻璃酸酶外其他试剂需经115℃，30 分钟高压灭 菌方可使用。 1.5 金黄色葡萄球菌菌液 用0.9%氯 钠溶液稀释至每1ml 含10～100 个菌。 2 实验步骤 2.1 供试液制备 在无菌条件下，用 针头的注射器把 30 支玻璃酸酶加入到 301ml 无菌磷酸 盐缓冲液中，混匀后用吸量管吸取1ml 加入到1 个需气菌、厌气菌培养基试管中， PDF created with pdfFactory trial version 作阴性对照。然后再用天平称取3.0 克注射级透明质酸钠加入到剩余的300ml 磷 酸盐缓冲液中，密封好瓶塞后，放在水温为42℃台式恒温振荡器中振荡至透明质 酸钠完全溶解 （1 小时左右），制成浓度为1%的透明质酸钠溶液。 2.2 操作方法 在无菌条件下，用吸量管各吸取上述供试液 1ml，分别接种于需气菌、厌气 菌培养基6 管中，其中1 管再接种金黄色葡萄球菌菌液 1ml，作阳性对照；另各 吸取1ml 供试液分别接种于真菌培养基5 管中，接种后轻轻摇动，使混匀。 2.3 培养并观察 需气菌、厌气菌培养基管置 30～35℃，真菌培养基管置 20～25 ℃的生化培 养箱中，连续培养 7 日，每日观察并记录各管是否有菌生长。7 日后，如不能从 外观上判断有无菌生长，可用接种环取培养液涂片，染色，用显微镜观察是否有 菌。 3 结果判断 3.1 当阳性对照管显浑浊并在开始培养的24 小时内就有菌生长，阴性管对照呈 阴性，其他需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或有的管显浑浊但经证明并 非有菌生长，则判供试品为合格。 3.2 如上述供试液培养管除阳性外其他任何1 管显浑浊并确证有菌生长，应重新 取2 倍量供试品，分别依法复试，除阳性管外其他各管均不得有菌生长，否则判 供试品不合