洋葱染色体核型的 FIS H 分析.PDFVIP

园　艺 　学 　报 　2003 , 30 (4) : 463～464 Acta Horticulturae Sinica 洋葱染色体核型的 FISH 分析 1 2 2 赵 　泓 　O. Schrader 　R. Ahne (1 北京市农林科学院蔬菜研究中心 , 北京 100089 ; 2 德国栽培植物育种研究所 , Quedlingburg D - 06484) ( ) ( ) 摘 　要 : 挑选洋葱 Allium cepa L. 2n = 2x = 16 , CC 有丝分裂中期细胞 , 以洋葱卫星 DNA 序列 (ACSATDNA) 为探针 , DIG11dUTP 为标记物 , 用荧光原位杂交 ( FISH) 方法观察其在染色体上的定位 , 并进行洋葱的核型分析 。6 号染色体为近端部着丝点染色体 , 在其长臂末端有一个卫星 DNA 序列的主要位 点 。其余每条染色体在其长 、短臂的末端都各具有一个主要位点 。差异表现在各染色体上卫星 DNA 序列的 次要位点分布不同。根据洋葱 8 对染色体各自具有的独特的卫星 DNA 分布位点 , 可将洋葱 8 对染色体全部 分开 。以此为基础 , 构建了洋葱卫星 DNA 在染色体上分布的模式图。 关键词 : 洋葱 ; 染色体 ; 卫星 DNA ; FISH ; 核型 中图分类号 : S 6332 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 0513353X (2003) 1 　目的、材料与方法 我国大约在 1980 年后开始了染色体核型分析的研究 , 在多种蔬菜植物中取得了成功 。早期制备 出的核型图通常只包括染色体全长 、着丝粒位置 、臂长 、臂比等形态学数据 〔1〕。随后发展起来的染色 体分带技术给人们带来更多的信息 。这两种分析方法存在一个共同的问题 , 即对大多数物种来说 , 即 使参考核型图和带型分析技术也很难在高倍显微镜下用肉眼直接区分出形态特征大致相似的两对或多 对染色体 , 更不可能鉴定出异源添加系中掺入的是哪条染色体 。 利用荧光原位杂交技术 , 德国栽培植物育种研究所成功的鉴别出携带有 目标染色体的油菜二体添 加系 。实现了不利用转基因技术也使感病植株获得抗性的目的。本研究的目的是利用荧光原位杂交技 术鉴别洋葱与油菜体细胞杂种后代中携带有 目标染色体的油菜二体添加系 。这就需要将洋葱的 8 条染 色体逐一区分开来 。 ( ) 洋葱 Allium cepa L. 种子由德国栽培植物育种研究所育种部提供 , 是当地常见栽培种 。探针 ACSATDNA 是一种洋葱特异的卫星 DNA 序列 。此序列也是多拷贝的重复序列 , 在洋葱染色体上有多 个位点 。荧光原位杂交方法见文献 〔2 〕, 略有修改 。 以荧光显微镜 (ZEISS) 观察试验结果 。DIG 杂交信号呈黄色 , 染色体呈蓝色 。黑白数码照相机 (ZEISS) 拍摄 。通过染色体分析软件 (MicroMeasure33) 对试验结果进行分析 。图像在 Photoshop50 中进行上色和叠加 。将 DIG 信号标记为黄色 , 将染色体标记为蓝色 。 2 　结果与讨论 ( 根据染色体的长度 , 用肉眼在显微镜下将洋葱的 8 条染色体分为 3 组 此分析方法与传统的正式 ) 的染色体组分析方法不同 , 其 目的仅仅是便于观察者区分各染色体 。第 1 组最长 , 包括 1 号 、2 号 、 3 号染色体