维生素d和糖尿病联系研究方案.pptVIP

项 目 名 称：维生素D对2型糖尿病的预防作用 ;一、立题依据及意义 ;糖尿病 （diabetes mellitus） ; 糖尿病患病人数与日俱增我国每天新增糖尿病患者约3000例每年大约增加120万例糖尿病患者预计到2025年，中国的糖尿病患者将超过5000万;Ⅱ型糖尿病患病率特点;Ⅱ型糖尿病发病年龄的年轻化;维生素D与Ⅱ型糖尿病;维生素D与Ⅱ型糖尿病的相关研究;维生素D预防Ⅱ型糖尿病的机制; ;二、技术路线 ;动物：120只健康雄性小鼠 药品：STZ（链佐脲菌素，Streptozotocin ）、1,25-(OH)2D3、柠檬酸盐缓冲液、花生油、肝素 仪器设备：哺乳动物手术器械一套、注射器、试管、便携式血糖仪、SDS电泳仪和转膜仪、摇床、离心机、胰岛素ELISA 检测试剂盒、光学显微镜 ;实验步骤;2、动物分组：每组30只小鼠（实验在相对较暗的环境中进行） 糖尿病组，隔日腹腔注射花生油(5μg·kg-1)，共14次；连续7d腹腔注射STZ（20 mg·kg-1）；分别于注射STZ的第1、2、3、4、6周末各测一次血糖，以血糖水平持续高于11.1mmol/L为判断成模的标准，期间喂食高热量食物。造模期间死亡动物不计入统计范围。 少量Vd组，隔日腹腔注射1,25-(OH)2D3（2μg·kg-1），共14次; 连续7d腹腔注射STZ（20 mg·kg-1），期间喂食高热量食物。 大量Vd组，隔日腹腔注射1,25-(OH)2D3（5μg·kg-1），共14次; 连续7d腹腔注射STZ（20 mg·kg-1），期间喂食高热量食物。 空白对照组，隔日腹腔注射花生油(5μg·kg-1)，共14次；连续7d腹腔注射与糖尿病组等容量柠檬酸盐缓冲液，期间喂以正常食物。;3、样本采集与处理：实验第9周，开始记录一周内各组小鼠的尿量和饮水量。第9周结束后，各组小鼠空腹8小时后，测糖耐量。之后，断尾取血用便携式血糖仪检测血糖水平；采集血清用胰岛素ELISA 检测试剂盒检测血清胰岛素水平；采集肝脏标本利用细胞免疫组化及Western blot法检测胰岛素受体的表达情况；采集胰腺标本利用Western blot法检测胰岛细胞Bax和Bcl-xL蛋白表达水平；取胰腺制作标本，观察胰岛B细胞损伤情况。;4、统计学分析：SPSS10.0软件处理。结果以±s表示。同组内处理前后比较用配对t检验。组间比较用完全随机设计的方差分析，若结果有意义再进行多个样本均数间比较的SNK-q检验（Bax、Bcl-xL阳性率经平方根转化后再进行统计分析）。糖尿病发病率用fisher确切概率法。P＜0.05表示差异有显著性，P＜0.01表示差异有极显著性。;三、结果预测;实验时程;9周后，各组小鼠空腹8小时后，测糖耐量。之后，断尾取血用便携式血糖仪检测血糖水平；采集血清用胰岛素ELISA 检测试剂盒检测血清胰岛素水平；采集肝脏标本利用细胞免疫组化及Western blot法检测胰岛素受体（IR）的表达情况；采集胰腺标本利用Western blot法检测胰岛细胞Bax和Bcl-xL蛋白表达水平；取胰腺制作标本，观察胰岛B细胞损伤情况。 记录实验结果,并分析. ; ; 数据处理结果存在具有统计学意义，则结果说明Vd确实对2型糖尿病的发生有所影响。 饮水量与尿量：少量组糖尿病组大量组 糖耐量：少量组糖尿病组大量组 血糖：少量组糖尿病组大量组 肝脏IR表达水平：少量组糖尿病组大量组 Bcl-xl表达水平：少量组糖尿病组大量组 Bax表达水平：少量组糖尿病组大量组 胰岛B细胞损伤情况：少量组糖尿病组大量组;四、讨论; 糖尿病是一种代谢紊乱综合症。它是由于胰岛素分泌相对或绝对不足、胰岛素活性的缺乏或是胰岛素抵抗等原因而导致的以高血糖为特征的疾病。 ;WHO推荐糖尿病分为四种类型 ;关于NIDDM;胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR)是指胰岛素作用的靶器官对胰岛素作用的敏感性下降，即正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种状态 ;维生素D;维生素D与NIDDM的关系;关于实验模型;关于实验数据; 血糖： 血糖浓度是反映是否患糖尿及病情轻重的最重要的指标，为主要的观察项目。它可以直接反应糖尿病的发病率，比较出不同浓度的Vd对NIDDM的发生的影响。 ;糖耐量： 通俗地说就是人体对葡萄糖的耐受能力。医院通常会对疑似糖尿病患者进行糖耐量测试，如果糖耐量试验服糖后2小时血糖介于7.8至 11.1毫摩/升，表明机体糖耐量能力减低，也就是说身体对糖的吸收和利用比正常状态差了。糖耐量越低说明机体对糖的耐受越差，病情越严重。所以可以通过检测实验动物的