浓缩的洗涤液应恢复至室温.pptVIP

ELISA 【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。 注意 量少、溶血、脂血、黄疸血，必须在申请单，接收上标明，对于影响很大的，必须委婉拒绝接收 【溶血】血液中的红细胞被破坏，释放到血中，使血清或血浆呈红色 【脂血】 脂内物质进入血液中，使血清或血浆呈乳白色 【黄疸】huangdan 血清或血浆中胆红素含量过高，肉眼观看显明黄色 血清样品的运输 冷藏 离心分离血清 血清的保存 弃掉血凝块的血清：冷冻 带血凝块的血清：冷藏 猪瘟抗体ELISA试剂盒武汉科前动物生物制品有限责任公司 试剂盒组成 黄色盖-样品稀释液 白色盖-20×洗涤液 蓝色盖-酶标二抗 棕色-底物液B 红色-底物液A 淡蓝/白色-终止液 阴阳性血清蓝色为阴性红色为阳性 抗原包被板和血清稀释板 试剂盒组成 （1） 抗原包被板 2板（96孔/板） （2） 阴性对照血清（蓝色盖子） 1管（1ml/管） （3） 阳性对照血清（红色盖子） 1管（1ml/管） （4） 羊抗猪酶标二抗（蓝色盖子） 1瓶（20ml/瓶） （5） 样品稀释液（黄色盖子） 1 瓶（50ml/瓶） （6） 底物液A（红色盖子） 1 瓶（10ml/瓶） （7） 底物液B（黑色盖子） 1 瓶（10ml/瓶） （8） 终止液（蓝色盖子） 1 瓶（10ml/瓶） （9） 20倍浓缩洗涤液（白色盖子） 1瓶（30ml/瓶） （10） 血清稀释板 2板（96孔/板）  【洗涤液配制】 使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃），并摇动，使沉淀溶解（最好在37℃水浴锅中加热5～10分钟），然后用蒸馏水作20倍稀释（例如：30ml的浓缩洗涤液加上570ml蒸馏水）混匀，稀释好的洗涤液2～8℃可存放7日。  【样品稀释】 在血清稀释板中按1:40的体积稀释待检血清样品（195μl样品稀释液中加5μl待检血清样品）。 【对照稀释】 在血清稀释板中按1:4分别稀释阳性对照和阴性对照（180μl样品稀释液中加60μl对照血清）。  【注意事项】 （1） 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。使用后放回2~8℃保存。 （2） 不同批号的试剂盒组份不得混用，不同试剂使用时应防止交叉污染。 （3） 底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。 （4） 待检血清数量较多时，应先稀释完所有待检血清，再加到抗原包被板上，使反应时间一致。 （5） 稀释20倍浓缩洗涤液时，如发现有结晶，应加热使其溶解后再使用。 （6） 移液时，应尽量准确，防止产生气泡。 （7） 应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。 （8）2~8℃避光保存，有效期为10个月。  【操作步骤】 1.取抗原包被板用稀释好的洗涤液洗板2次；2. 将稀释好的待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清各取100μl加至抗原包被板中，待检血清设1孔，阴、阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品，置37℃下温育30分钟。  【操作步骤】 3.弃去孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟后，弃去洗涤液，并在吸水纸上拍干，重复洗涤5次。 4.每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃下温育30分钟。  【操作步骤】 5.每孔加底物液A 50μl、底物液B 约 50μl，混匀，置室温（20~25℃）下避光显色10分钟。 6.每孔加入终止液50μl，10分钟内测定结果。  【结果判定】 在酶标仪上读各孔OD630nm值。试验成立的条件是：阳性对照孔OD630nm值均应≥0.6，阴性对照孔OD630nm值均应＜0.3。计算样品对照平均值和样品的S/P值。 若S/P≥0.17，判为猪瘟抗体阳性；若S/P＜0.17，判为猪瘟抗体阴性。