核桃褐斑病研究.docVIP

核桃褐斑病的研究 摘要 林间观测、室内镜检及人工接种试验证明核桃盘二孢Marssonina juglandis Magn是核桃褐斑病的病原菌，核桃盘二孢5月初开始产生分生孢子，6月中旬为发病和分生孢子流行高峰期，至7月中旬分生孢子雨后减少，发病减轻。一般以中幼树危害严重，树冠西北侧比东南发病严重，树冠下部比中上部发病严重，内部比树冠表层发病重。 多种杀菌剂对核桃盘二孢Marssonina juglandis Magn的室内毒力测定结果显示，70%甲基托布津、百菌清、多菌灵、退菌特、乙磷铝锰锌对病菌分生孢子的萌发具有强烈的抑制作用； 其中甲基托布津、乙磷铝锰锌对病菌菌丝生长的抑制作用明显。 关键词 核桃褐斑病 研究 核桃褐斑病以前在我市尚未见报道，是我市城口县近年来爆发的一种病害，该病在陕西、河北、吉林、四川、河南、山东等地均有发生，主要危害叶、嫩梢和果实。引起初期落叶、枯梢，影响树木生长。以前各地报道也多以危害叶片及嫩梢为主，而对危害果实报道较少。2000年以前即由引进的苗木穗条传入我市，最初只发病于少数长势衰弱核桃林、幼林且零星分布，造成的损失也不大，并未引起足够的重视，随着核桃银杏大蚕蛾、核桃长足象等虫灾的大面积啃食危害，造成的机械伤害成为病原菌侵入的最佳途径，同时也成为来年的病原地而反复侵染传播，加上2001年4月我市城口等地遭受严重罕见雪灾，雪灾造成的严重冻伤地加剧了病害的侵染流行，出现了普遍严重爆发的势头，部分危害严重的果树出现早衰死亡的迹象，致使核桃大量提前落果或不挂果，产量大幅下降，并造成部分植株生长衰弱至死亡。2002年-2003年课题组对核桃褐斑病进行了系列观察和研究。 1 材料和方法 1.1 林间发病情况观察 于2002-2003年在城口高望试验地内进行研究试验，防治示范片设在城口县高观、东安、什邡、修齐、明通、白屏、红花等乡镇。选择不同立地条件具代表性的核桃树10棵，每树固定2枝，每枝固定20片叶，结果时每枝固定10果，分别标记编号作固定样株、样枝、样果。每隔5天调查1次，观测叶片和果实上的病斑出现的始盛期，病斑数量及所占全叶全果面积的百分比。全县核桃主产区按不同海拔、不同坡向等立地条件进行不定期调查，研究点及重点核桃主产区每月调查1次。均在核桃叶、枝、芽、梢、果实、主干等部位进行详细调查病害种类、发病率、感病指数及对地上落果剖查观察落果原因。 1.2 用病原菌分生孢子捕捉法观察传播扩散规律 为研究病原孢子的来源，2002年4月1日至9月，我们用5根平均6米高的竹竿，立于坡度、方位、海拔均不同的6个地点，在竹竿2m、3、4m、5m、6m、7m、8m、9m处的东南西北四个不同方位各放置一块带甘油的载玻片，每隔2天检查一次孢子种类、密度及数量并更换载玻片，记录分生孢子水平传播、垂直传播情况；捕捉病原菌孢子时选择6棵标准株，在核桃树冠内挂置培养皿，内置涂有甘油的玻片用夹子分别挂在标准株树冠中上下层，每层分东南西北四个方向，逐日定时换取玻片镜检，每玻片一次观测九个视野，分别统计分生孢子数以次来分析孢子扩散的时期。 1.3 核桃褐斑病病原菌的鉴定与分离培养 1.3.1室内的实验室鉴定 在从各样地内采回的核桃病果、枝叶上，采用徒手切片法切取病健交界处的组织，从5月份开始至8月底每隔5天在室内显微镜40×10倍～10×100倍显微镜下观察；制作病害各个时期的石蜡标本封存。 1.3.2制作培养基 制作适用于一般真菌培养用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，其配方成分如下：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂17克。水1000毫升和用于分离病原真菌的肉汁胨培养基，其配方成分如下：牛肉浸膏3克，蛋白胨5-10克，琼脂17克，水1000毫升。 1.3.3病原分离 2002年4月下旬从林中按不同海拔、不同标准地采集核桃病害标本，经火焰表面消毒后用90%医用酒精浸泡3秒，再用无菌水冲洗3次，切取核桃叶、果病部与健康部交界的组织，经表面消毒后，置于培养皿PDA培养基上，每只培养皿接4－5块；或将消毒好的病组织块接入试管PDA斜面上，每只试管接1块，均置于生化培养箱中培养（温度控制24－28℃），采用一般分离的方法分离得病原菌的纯种分生孢子悬液，稀释20-100倍后，用倒平板法接入PDA培养基内，置于生化培养箱中培养（温度控制24－28℃），观察病原菌菌落发育进度、菌落形态特征。并保存病原菌菌种待用。 1.4病原菌接种试验验证病原菌侵染情况 2002年5月课题组采用伤口接种、喷洒接种两种方法进行了接种试验，试验地选择在高望镇金洪3社，试验地条件为一块2-3年生幼林纯林，未见发病，面积约1亩，周围与农田和杉木林，与核桃历史病区相隔2公里。 1.4.1伤口接种：以组为单位取核桃嫩枝5根，除留顶部20张叶片外，其余