腺病毒使用说明书.PDFVIP

深圳市百恩维生物科技有限公司 腺病毒使用说明书 ★ 腺病毒的储存与稀释 1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用腺病毒进行实验，可以将病 4 -80 毒暂时放置于 ℃保存；如需长期保存请放置于 ℃（病毒置于冻存管，并使用 封口膜封口）。 -80 6 6 ① 病毒可以存放于 ℃ 个月以上；但如果病毒储存时间超过 个月， 建议在使用前需要重新测定病毒滴度。 ② 反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒 使用过程中应尽量避免反复冻融，为避免反复冻融，建议收到病毒后按照每次的 使用量进行分装。 2. 病毒的稀释：如果需要稀释病毒，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用PBS 缓冲液或培养目的细胞无血清培养基含血清或含双抗不影响病毒感染 。混匀分( ) 4 ( ) 装后 ℃保存请尽量在三天内用完分装后使用。 ★ 腺病毒感染目的细胞预实验 在正式实验前，需要进行腺病毒感染目的细胞的预实验，该实验的目的：第 一，检测腺病毒是否能够感染目的细胞；第二，腺病毒感染目的细胞的最佳条件 （即最佳的MOI值）。通常使用带有荧光标记的腺病毒。具体实验步骤如下： 1. 96 1-2 104 96 以 孔板为例，实验前一天分别接种 × 个目的细胞于 孔培养板中 8 100µl （至少接种 个孔的细胞），所加培养基体积为 。不同种类的细胞生长速度 50 有所差异，为保证有较好的实验结果，进行病毒感染时细胞的融合率约为 ～ 60%。 2. 6 EP EP 990µl 准备 个无菌的 管，在第一个 管中加入 的完全培养液，其余的 5个管子中各加入900µl的完全培养液。 3. 10µl 990µl EP 1:100 10-2 取 腺病毒原液加入 的 管中做 稀释（ ）；然后以此为起 -3 -7 100µl 900µl EP 1:10 (10 ) 10 点，再取 稀释液加入到 的 管中做 稀释 ，直至稀释到 。 4. 96 从孵箱中取出 孔板，在显微镜下确定每孔的细胞均生长良好。吸弃旧培养 10-3 10-7 96 液，然后依次将 至 稀释的病毒液加入 孔板中，每种稀释度的病毒取 地址： 中国广东省深圳市宝安67区留仙一路高新奇工业区二期1号楼5楼 邮政编码： 518100 电话： + 86-755 传真：+ 86-755 网址： 深圳市百恩维生物科技有限公司 100µl 96 加入到 孔板中，未加入病毒的细胞孔中加入同样量的完全培养基作为对 照组。 5.8-12小时以后请观察细胞状态。如果细胞状态与未感染组无明显差异，表明该 病毒对细胞没有明显毒性作用，请不要换液，继续培养。 6.