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应用手册105 使用FluorChem®HD2成像系统进行化学发光免疫蛋白印迹检测 摘要 使用FluorChem®HD2成像系统采集数字图像是与化学发光免疫 FluorChem®HD2图像的图像质量更高。 蛋白印迹检测胶片相比较而言的。结果表明数字图像在同等曝 把一个上样有全部细胞细菌裂解液的、纯化转座酶蛋白质和标 光时间下比检测胶片产生的图像质量更高、获得的动态范围更 准蛋白条带的标准 SDS凝胶溶解，使用标准转膜技术转 宽、蛋白质检出含量更低。随着每张图像的成本降低、时间减 移到一个印迹膜上。封闭该印迹，以兔抗转座酶一抗温育，然 少、图像归档以及定量图像分析，数字成像技术是化学发光免 后以辣根过氧化物酶结合的羊抗兔抗体标记。该印迹以ECL化 疫蛋白印迹检测中可供选择的最佳方法。 学发光检测试剂盒（GE Healthcare）处理，在正常分辨率(无 引言 结合)条件下使用FluorChem® HD2成像系统五分钟成像。然后 该印迹胶片曝光5分钟，制成胶片。 免疫蛋白印迹法是广泛使用的方法，它的特性优良，用于量化 在细胞培养、组织、血清和纯化蛋白样品（1）中的蛋白质丰 系列狭缝印迹稀释液 度。化学发光是一种利用酶和过氧化物底物催化反应产生光信 FluorChem® HD2系统量化蛋白数量的能力通过成像和分析系列 号的标准检测技术，无需光照，背景噪音低。酶与二抗结合， 稀释蛋白进行评估。 二抗与一抗结合，一抗特异性与目的蛋白结合。研究人员广泛 制备一系列稀释度的辣根过氧化物酶结合的抗体（goat 应用化学发光技术，因为它与放射方法相比危险更小，但具有 antirabbit IgG Horseradish Peroxidase Antibodies Inc, 同等的性能。 Davis,CA），采用歧管型过滤器（The Convertible, Gibco 通过曝光胶片进行化学发光检测是常用的方法，该法的线性范 BRL,Gaithersburg, MD），把它们沉积在低自发荧光杂交膜 围有限，胶片相互作用差。 （(Millipore-FL）的表面。在第一沉积带上的蛋白质的浓度 FluorChem®HD2和FC2成像系统采用CCD相机、快速镜头、暗箱 为全部蛋白质的1ng。另外稀释液包括一系列1：10稀释度，最 实现定量化学发光检测；当优化使用时，该免疫蛋白印迹分析 后浓度每沉积带为100fg。该印迹以ChemiGlow® 系统处理，并 工具功能强大。与Alpha Innotech ChemiGlow® 化学发光底物 在FluorChem® HD2成像系统上成像。 配合使用，可以快速成像并获得高品质图像和精确结果。并且 不需要昂贵的检测胶片和胶片冲洗。 材料与方法 化学发光免疫印迹的胶片检测与FluorChem®HD2检测 通过在相同印迹上成像来评估胶片和FluorChem®HD2性能。首 先在FluorChem®HD2上然后在胶片上成像影。