毛细管电泳 2 激光诱导荧光检测肌腱和.PDFVIP

第 34卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究简报 第 10期 　　　　　　 　　　　　 　　　　　　 　　　　　 2006年 10月 Chinese Journal of Analytical Chem istry 144 1～1444 毛细管电泳 激光诱导荧光检测肌腱和 肌腱细胞中的羟脯氨酸 邹晓莉 　周春艳 　黎源倩 　曾红燕 (四川大学华西公共卫生学院卫生检验教研室 ,成都 61004 1) ( ) 摘 　要 　建立毛细管电泳 激光诱导荧光检测 CEL IF 分析羟脯氨酸的方法 。肌腱和肌腱细胞中的胶原蛋白碱 ( ) 水解生成氨基酸 ,经异硫氰酸荧光素 F ITC 衍生 ,采用 L IFCE分离测定胶原蛋白特异性氨基酸 羟脯氨酸 。羟 3 μ μ μ 脯氨酸在 0. 5 g/L ～8 ×10 g/L 浓度范围内线性关系良好 ;检出限为 0. 5 g/L 。相对迁移率和相对峰高的相 ( ) 对标准偏差 R SD 分别为 5. 0%和 6. 1% 。测定了 60份肌腱和 9份细胞样品 ,加标回收率为 95% ～110% 。将 ( ) 所建立的毛细管电泳方法与高效液相色谱法 HPLC 进行比较 ,两者测定结果相对误差为 - 1. 9% ～2. 0% 。本 法仅需一次荧光标记 ,操作简单 、快速灵敏 , 12m in 内完成一个分析周期 ,适于测定肌腱和细胞样品。 关键词 　羟脯氨酸 ,激光诱导荧光检测 ,毛细管电泳 ,肌腱 ,细胞 1　引　　言 组织工程技术是肌腱缺损治疗的一种新途径 。在肌腱组织工程研究中 ,通常需要观察植入的肌腱 细胞生长状况和支架材料的降解情况 ,测定其中胶原蛋白含量的变化可作为考察指标之一 [ 1 ] 。羟脯氨 酸是胶原蛋白的特异性氨基酸 ,其含量稳定 ,一般动物性蛋白质不含此种氨基酸 。因此 ,可以通过检测 样品中羟脯氨酸的含量变化反映胶原蛋白含量的变化 。 目前 ,测定羟脯氨酸的方法主要有分光光度法 [ 2 ] 、HPLC[ 3 ]和气质联用法 [ 4 ] 。毛细管电泳 激光诱导 ( ) 荧光检测 CEL IF 可大大提高测定的灵敏度 ,从而满足生物样品测定的要求 。已有诸多报道采用 L IF CE测定氨基酸 ,并取得满意的分析结果 [ 5 ] 。而用于测定羟脯氨酸 , 国外发表的论文只有几篇 [ 6 ] , 国内 尚未见报道 。本研究采用 F ITC衍生羟脯氨酸 ,建立 L IFCE分析方法 ,并应用于肌腱细胞和组织化工程 肌腱样品的分析 ,为组织工程研究提供一种灵敏快速的分析手段 。 2　实验部分 2. 1　仪器与试剂 ( ) 激光诱导荧光检测 毛细管电泳仪 自行组装 ,氦氖激光器发射波长 543 nm , 590 nm 波长处采集荧 [ 7 ] ( )