抗噬菌体谷氨酸生产菌的选育：细胞融合技术在细菌[1.pdf

维普资讯 烟台大学学报 (自然科学与工程版) 99,0卑簟 l霸 -mI．1d ·埘Iu‘niv。喇咿 N‘哪 rtISci,m~-hd薯|蝴l蝴 I ) 抗噬菌体谷氨酸生产菌的选育 — — 细胞融合技术在细菌育种方面的应用 王 长海 董碧虹 张惟杰 (烟台大学。 (戈京大学) 摘 要 本文年|用 蚪缱谤变的方{盏褒措 丁抗噬一体各氰盈生产翻锋．为挺高抗聪蘸体精辟的产 量 ．作者对答氮畦生产菌进行了羁删融合试验 ．站晕获褂 了产艘为5．e— 0 的抗噬甜体箝 氟艘生产醇．在1适量青霉素存枉下可挂耨 99．9 的氟生质体．选用最佳条件再生事遗20 ． 在造择培养菇 ￡获得融合予．其矬台率达 l-l5×J0 ·量般．其中弄嚆蔺傩抗性的茧糠占 22．2 ． 美键词 ： 噬西体 爸氨醚生产菌 原生质体 融舍 一 引 言 蹴菌体的污染给谷舞：酸工业生产带来巨大经济损失 。为获得抗蹴菌体咎氨酸生产菌 株 ，本文运用原生质俸融台手段进行了实验 ，结果鼍免了直接从污染环境中筛选到的自然 抗性菌株容易被蹴菌悼再次感 ’的问题，同时克暇了从理化诱变中直接获得的抗性髓 其生产能力经常下降辞育种方法存在的缺点。 原生质体融合是工业徽生物基因重组育种的一种新技术 [I]，是一种不受性的局限的 基因重组方式 ，因此可以实现种问、属问的超远缘杂交而被广迂用于育种工作 】．关于棒 状杆菌的融合工作，国内外也做过一些研究 【|·”．但关于抗嘴营体株的融台工作尚未见 有关报道 。 =． 斌 与 港 (～) 材料 1． 菌种及蹴苗体 ， ① 钝齿棒轩H(C~v．ebe~et；m e—I_m) ，系 Hutt经氯化锂处理得到的谷氟酸生 收穰 日期 、I9曲年7凡25日． 蕞谢 ．奉文再舅矗存熏先生指导且#稚 等老■的孵助．1蕞此敛埘． 25 维普资讯 产莆 ． ② 短杆菌( 咄r ．)n～…未定名的谷氰酸生产菌LI】． ③ 大肠轩菌 AlY1．506，爸氨酸啦羧酶剜备甩越 ． 上述菌种由烟台味精厂及烟台大学提供． ④ 噬菌体 ‰ 、ut，中科院余茂敷先生提供 2． 培养基 ： ① 肉膏蛋白胨 (LB)液体培养基 (S／1)：牛内膏5．0，蛋白胨11)．0iNaCI5．0-葡萄糖 1．0·加蒸馏水至1000毫升、PH7．O--7．2． ② L 同体培养基tL毋藏体培养基中，底层加辣脂2 ，上层加】 ． ③ B．种子培养基 (S／I)：葡萄糖25．0，K：一HPO~I．0，尿素3．0．皮渣5．0．玉米 浆 20．0，I~IsSO．·7tt20O．{．Feso．·7rl,O及MnSO．·7rl,O各O．Oo2。加蒸馏水至1OO0毫升．PII7． 0— 7．2． ④ B发酵培养基 (g／I)：葡萄糖130．0，KdtPO~I．6。初尿10．O．麦皮渣10．0。玉米浆 10．0，^ sol·7H|o0．6及 MnSO~·7H|o和FeSO ·7HIo各0．007．加蒸馏水至 l000毫升， PH7．O一7．2．流加尿索配成3O (W ／V)单消侍用 ． @ T--一-s种子培养基 (S／I)：葡萄糖25．O，K21rtPO．1．O，尿素5．O，麦皮渣2．0，玉米象25． 0．MsSO,·7Hlo0．I4， ”及 Mn”各0．002，加蒸馏水至l000毫升 ，PH7．0—7．2． @ T -发酵培养基 (g／I)：葡萄糖14d．O