耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在 酶解玉米芯木聚糖中的应.PDFVIP

耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在 酶解玉米芯木聚糖中的应.PDF

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耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在 酶解玉米芯木聚糖中的应.PDF

- 林业工程学报,2017,2(4):63 69 Journal of Forestry Engineering - doi:10.13360/ j.issn.2096 1359.2017.04.011 耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在 酶解玉米芯木聚糖中的应用 李琦,陈明真,赵林果∗ (南京林业大学化学工程学院;江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室,南京 210037) 摘  要:为寻求具有耐热性能的木聚糖酶,笔者以嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)DSM3960 的基因组为 模板,克隆得到木聚糖酶基因xynB⁃DT,该基因全长1083 bp,共编码361个氨基酸,蛋白的理论分子量约为40 ku。 通过NCBI数据库比对发现该基因编码的蛋白质属于糖苷水解酶G11 家族。 实现大肠杆菌异源表达重组 木聚糖酶XynB⁃DT,通过IPTG诱导,酶活达到30.6 U/ mL。 该重组木聚糖酶的最适温度为85℃,在60~80℃范 围内均有较好温度稳定性,在60℃条件下保温2 h,酶活维持在90%以上,在90℃下保温2 h,酶活尚残余约 50%;最适pH为65,在pH为50~75范围内保温24 h仍可保留约90%剩余酶活力。 该酶以Beechwood木聚 -1 糖为底物,米氏常数(K )和最大反应速率(V )值分别为563 mg/ mL和 1572 mmol/ (L·min )。 以玉米芯木 m max 聚糖为底物,研究XynB⁃DT水解玉米芯木聚糖的条件及产物,结果显示在温度70℃、pH60条件下酶解12h,加 酶量为400 U/ g,最终酶解得率为443%,玉米芯木聚糖的水解产物主要以木二糖和木三糖为主,表明该木聚糖 酶在低聚木糖制备方面具有较大应用潜能。 关键词:嗜热网球菌;木聚糖酶;克隆;水解 - - - 中图分类号:Q819      文献标志码:A      文章编号:2096 1359(2017)04 0063 07 Cloning and expressionof a thermophile GH11xylanase gene and its application inxylooligosaccharide production LI Qi,CHEN Mingzhen,ZHAO Linguo∗ (College of ChemicalEngineering,Nanjing Forestry University;JiangsuKey Laboratory of BiomassBased Green Fuels and Chemicals,Nanjing 210037,China) Abstract:The GH11endo⁃1,4⁃xylanase gene,xynB⁃DTfrom Dictyoglomus thermophilum DSM3960 was cloned and expressed in Escherichia coli.Thefull⁃lengthgenecontained 1083bp,whichencoded361aminoacids.Therecombi⁃ nant plasmid pET⁃20b⁃xynB⁃DTwasreconstructedandexpressedintheE.coliBL21successfully.Ina

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