耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在 酶解玉米芯木聚糖中的应.PDFVIP

－ 林业工程学报，２０１７，２（４）：６３ ６９ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ － ｄｏｉ：１０．１３３６０／ ｊ．ｉｓｓｎ．２０９６ １３５９．２０１７．０４．０１１ 耐热木聚糖酶基因的克隆表达及其在 酶解玉米芯木聚糖中的应用 李琦，陈明真，赵林果∗ （南京林业大学化学工程学院；江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室，南京 ２１００３７） 摘　 要：为寻求具有耐热性能的木聚糖酶，笔者以嗜热网球菌（Ｄｉｃｔｙｏｇｌｏｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）ＤＳＭ３９６０ 的基因组为 模板，克隆得到木聚糖酶基因ｘｙｎＢ⁃ＤＴ，该基因全长１０８３ ｂｐ，共编码３６１个氨基酸，蛋白的理论分子量约为４０ ｋｕ。 通过ＮＣＢＩ数据库比对发现该基因编码的蛋白质属于糖苷水解酶Ｇ１１ 家族。 实现大肠杆菌异源表达重组 木聚糖酶ＸｙｎＢ⁃ＤＴ，通过ＩＰＴＧ诱导，酶活达到３０．６ Ｕ／ ｍＬ。 该重组木聚糖酶的最适温度为８５℃，在６０～８０℃范 围内均有较好温度稳定性，在６０℃条件下保温２ ｈ，酶活维持在９０％以上，在９０℃下保温２ ｈ，酶活尚残余约 ５０％；最适ｐＨ为６５，在ｐＨ为５０～７５范围内保温２４ ｈ仍可保留约９０％剩余酶活力。 该酶以Ｂｅｅｃｈｗｏｏｄ木聚 －１ 糖为底物，米氏常数（Ｋ ）和最大反应速率（Ｖ ）值分别为５６３ ｍｇ／ ｍＬ和 １５７２ ｍｍｏｌ／ （Ｌ·ｍｉｎ ）。 以玉米芯木 ｍ ｍａｘ 聚糖为底物，研究ＸｙｎＢ⁃ＤＴ水解玉米芯木聚糖的条件及产物，结果显示在温度７０℃、ｐＨ６０条件下酶解１２ｈ，加 酶量为４００ Ｕ／ ｇ，最终酶解得率为４４３％，玉米芯木聚糖的水解产物主要以木二糖和木三糖为主，表明该木聚糖 酶在低聚木糖制备方面具有较大应用潜能。 关键词：嗜热网球菌；木聚糖酶；克隆；水解 － － － 中图分类号：Ｑ８１９　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 文章编号：２０９６ １３５９（２０１７）０４ ００６３ ０７ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅ ＧＨ１１ｘｙｌａｎａｓｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎｘｙｌｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ＬＩ Ｑｉ，ＣＨＥＮ Ｍｉｎｇｚｈｅｎ，ＺＨＡＯ Ｌｉｎｇｕｏ∗ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ＢｉｏｍａｓｓＢａｓｅｄ Ｇｒｅｅｎ Ｆｕｅｌｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００３７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ＧＨ１１ｅｎｄｏ⁃１，４⁃ｘｙｌａｎａｓｅ ｇｅｎｅ，ｘｙｎＢ⁃ＤＴｆｒｏｍ Ｄｉｃｔｙｏｇｌｏｍｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ ＤＳＭ３９６０ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ．Ｔｈｅｆｕｌｌ⁃ｌｅｎｇｔｈｇｅｎｅｃｏｎｔａｉｎｅｄ １０８３ｂｐ，ｗｈｉｃｈｅｎｃｏｄｅｄ３６１ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉ⁃ ｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｐＥＴ⁃２０ｂ⁃ｘｙｎＢ⁃ＤＴｗａｓｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｉｎａ