分子生物学第七章 DNA的重组与转座.pptVIP

第七章 DNA的重组与转座;7.1 同源重组 7.2 位点特异性重组 7.3 转座作用 7.4 逆转录转座子 ; 广义上，任何造成基因型变化的基因交流过程都叫遗传重组（genetic recombination）. 狭义上，指涉及到DNA分子内断裂-复合的基因交流，有时又称交换（crossing over）. 通过不同个体间的基因交换，可以保证遗传的多样性，从而为选择奠定物质基础。 遗传重组包括同源重组，位点专一性重组，转座重组和异常重组。 ;7.1?同源重组(homologous recombination);同源重组的机制;（二）重组过程:由Holliday提出，后经Messelson，Radding修改，可以分为以下几个步骤. 1、切断（nicking）：同源联会的两个DNA分子中任意一个出现单链切口（由某些DNA内切酶产生）。 2、链转换（strand displacement）：切口处形成5`端局部解链，由细胞内类似于大肠杆菌DNA Pol I的酶系利用切口处的3`-OH合成新链，而把原有链转换出来，???原有链成为游离的5`-单链区段。 ;3、单链侵入（single-strand invasion）由链置换产生的单链区段侵入到参与联会的另一条DNA分子因局部解链而产生的单链泡中。 4、Loop切除：侵入的单链DNA与参与联会的另一条DNA分子中的互补链形成碱基配对，同时把与侵入单链的同源链置换出来，由此产生D-Loop，其单链区随后被切除降解。 5、链同化（strand assimilation ）Loop切除中产生的3`-OH断头和侵入的单链的5`-P由DNA Ligase联接，同时侵入的单链沿5`-3`方向继续置换，Loop切除中产生的5`-P断头。 6、异构化：链同化过程中，DNA经过一定的扭曲旋转形成的异构体。 7、分支迁移（branch migration）：两条DNA分子之间形成的交叉点可以沿DNA移动，这一过程称为分支迁移。 ;图、分枝迁移;Holliday结构的拆分 重组体连接两个DNA双链的交换中间物含有4股DNA链，在其连接处为转换配对所形成交叉链的连接点称为Holliday结构。该结构中由二对连锁在一起的DNA分子组成。 Holiday中间体的形成只完成了重组的一半，由于连锁在一起的两条DNA分子必须经过拆分（resolution）回复到彼此分开的双螺旋状态。拆分的方式有两种，需要内切酶在交叉点处形成一对切口，然后由连接酶连接。 ;细菌DNA的重组 ;1、单链摄入和链交换 RecA蛋白作用于DNA分子，用单链去置换双链分子的同源区段，这个反应称单链摄入。RecA蛋白的这种作用是通过与游离的单链3`-端结合，并引导单链DNA侵入双链DNA中，这种作用还需要RecBCD的协助。 E.coli中有一种Chi[Kai]结构： 5`-GCTGGTGG-3` 3`-CGACCACC-5` ;RecBCD沿双链滑行至Chi结构附近时，将其附近的兔耳结构的一端切开形成具有3`-端的单链区，RecA再与此单链DNA的3`-端结合并引入另一双链结构中导致重组，RecBCD则沿双链继续寻找下一个Chi结构。 兔耳结构：RecBCD结合DNA，使解链速度大于恢复双螺旋的速度，所以形成二个单链环，称兔耳结构。 ;同源重组的作用 1、维持种群的遗传多样性 2、在真核生物中同源重组使同源染色体的染色单体间发生物理连接，这样使第一次减数分裂时同源染色体能平均分配至子代细胞中。 3、有助于DNA损伤的修复，发生重组的位置常含有错配的碱基。 ;7.2 位点专一性重组; 细菌的附着位点称attB，由序列BOB`组成，噬菌体的附着位点称attP，由序列POP`组成，其中O序列为attB和attP所共有，称为核心序列。重组就发生在这段序列上。 在重组过程中λDNA以线性形式插入细菌染色体，此时原噬菌体被重组产生的两个新的att（attL，attR）位点所固定，整合过程在attB和attP之间识别，而切除过程在attL和attP之间识别。 ;Figure . Does recombination between attP and attB proceed by sequential exchange or concerted cutting?;Figure 14.21 Staggered cleavages in the common core sequence of attP and attB allow crosswise reunion to generate reciprocal re