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湖南农业大学课程论文 学 院： 生物科学技术学院 班 级：生物科学二班 姓 名： 李晔 学 号：201342160210 课程论文题目： 课程名称：发酵工程 评阅成绩： 评阅意见： 成绩评定教师签名： 日期： 年 月 日 土壤中产木糖醇酵母菌株的筛选其发酵条件优化 13级生科二班 李晔 201342160210 摘要：本文以木糖为唯一碳源从土壤中筛选得到可以耐受高浓度木糖的菌株，再经过复筛选出一株高产木糖醇的酵母菌株 Y-9。经高效液相色谱(HPLC）和红外扫描分析，确定菌株 Y-9 发酵利用木糖转化得到的主要产物为木糖醇。通过单因素实验、正交试验等 手段，对菌株 Y-9 发酵产木糖醇的培养基组分和发酵条件进行了优化，进一步提高了目的菌株的木糖醇产率和转化率，确定了菌株Y-9 摇瓶发酵木糖转化木糖醇的最优培养基和发酵条件。在木糖初始浓度为 200 g/L氮源为酵母膏 3.0 g/L，硫酸铵 2.0 g/L，玉米浆10.0 mL/L，硫酸镁 0.1 g/L，初始 pH 为 6.0，转速为 180 r/min，接种量为 4%的条件下，菌株 Y-9 的木糖醇产率为 160 g/L 左右木糖醇生成速率为1.67 g/L·h，木糖/木糖醇转化率达到 80%以上，是一株具有良好工业化研究开发价值的木糖醇生产菌株。 关键字：木糖 木糖醇 发酵 条件优化 木糖醇在自然界中广泛存在于许多水果、蔬菜中，同时也是人体糖类代谢的一种中间代谢产物，每天正常的新陈代谢产生 5~15 g 的木糖醇。木糖醇为白色结晶或结晶性粉末，甜度与蔗糖相当，易溶于水，但吸湿性小，无美拉德反应。口腔内多数的微生物不能利用，因此木糖醇有防龋齿功效。木糖醇在人体内的吸收代谢不需要胰岛素的参与，而且能促进胰岛素的分泌，是糖尿病人理想的食品与治疗良药。木糖醇还具有多元醇的多种特性，因此木糖醇被广泛应用于食品、医药工业，另外，在造纸、卷烟、牙膏、涂料等领域也有较好的应用潜力 。目前，木糖醇的工业化生产主通过木糖镍催化加氢还原制造，成本高，耗能大，对环境污染也比较大。随着世界人口和环境压力的增加，人们对环保和节约能源的意识加强，以及人们对功能性食品的需求的增长，微生物生产木糖醇可以作为更加经济实惠的一种替代方式。微生物发酵法生产木糖醇以其条件温和、操作简便、副产物少、环境污染低等优点已经引起人们的广泛关注。根据相关文献报道，发现可以利用木糖转化为木糖醇的微生物中细菌很少、大部分是霉菌和酵母。其中研究最多的是酵母。细菌、霉菌中转化木糖为木糖醇能力普遍较差。据报道酵母转化木糖醇的能力最强，前景最好。但是目前，木糖/木糖醇转化率和木糖醇产率是限制微生物转化生产木糖醇规模化的关键因素。因此，获得优良菌株、优化发酵工艺控制仍是生物转化木糖醇生产研究的重点。 1 材料与方法 1. 培养基 富集培养基：木糖 300 g/L，MgSO4·7H2O 2 g/L， KH2PO4 2 g/L，(NH4)2SO4 2 g/L，NaCl 2 g/L；平板筛 选培养基：木糖 100 g/L，酵母膏 3 g/L，MgSO4·7H2O 1 g/L，KH2PO4 2 g/L，NaCl 2 g/L，琼脂 20 g/L；复筛 培养基：木糖 100 g/L，酵母膏 5 g/L，玉米浆 10 mL/L， (NH4)2SO4 2 g/L，MgSO4·7H2O 2 g/L，KH2PO4 2 g/L， NaCl 2 g/L，pH 自然； 种子培养基：木糖 50 g/L，酵母膏 5 g/L，MgSO4 1 g/L，KH2PO4 2 g/L，NaCl 2 g/L；发酵培养基：同复 筛培养基。所有培养基中的木糖均与其它成分分开灭菌1.2.1菌种筛选 取土样5 g，加入到50 mL 无菌水中，振荡10 min， 静置后取 5 mL 上清液接种到富集培养基中，180 r/min 摇床培养 7 d。将富集后的培养液进行适当稀释，涂布 在平板筛选培养基上，30 ℃培养 3~5 d，挑取酵母状 菌落转接到斜面。斜面在 30 ℃培养 2~3 d斜面菌种培养成熟后，转接到三角瓶复筛培养基， 于 30 ℃，180 r/min 摇床振荡培养 72 h，离心。用纸 层析检测挑选有木糖醇斑点的菌株并用 HPLC 检测发 酵清液中的木糖残余量和木糖醇产量，筛选木糖利用率高、木糖醇产量高的菌株。 1.2.2 生物量测定 将发酵液稀释20 倍，用可见分析光度计在570 nm波长下测定吸光度。 1.2.3 pH 值测定 利用 PSH-2C 精密型酸度计进行测定1.2.4 产物定性 将发酵液离心取取