马来酸曲美布丁片微生物限度检查方法.doc

马来酸曲美布丁片的微生物限度的检查方法 马来酸曲美布丁为 3,4,5-三甲氧基苯甲酸(2-二甲氨基,2-苯基)丁酯的马来酸盐,在水中微溶,制成的片剂在微生物限度检查中,由于溶解度小,培养过程中 马来酸曲美布丁在培养基内或表面析出,形成放线状或梭状的结晶,影响细菌和霉菌的观察和计数。为此我们参照中国药典1995年版附录微生物限度检查法和卫生部药品卫生检验方法,以吐温-80作为稳定剂和助溶剂,并适当扩大稀释倍数以增加溶解度,防止马来酸曲美布丁的析出;即用含不同浓度吐温-80的生理盐水和磷酸盐缓冲液制备成1：20的供试液,进行析出结晶和微生物检出试验;结果表明磷酸盐缓冲液中加入少量吐温-80能较好的阻止马来酸曲美布丁的结晶析出,且不影响微生物的检出。现将试验报告如下： 1、试验材料： 1．1样品 马来酸曲美布丁（海南普利制药厂） 马来酸曲美布丁片（海南普利制药厂，批号 980610，980611，980612） 马来酸曲美布丁片（舒丽启能，天津田边制药有限公司 批号 9802001） 1．2试剂 氯化钠， 磷酸二氢钾，氢氧化钠,吐温-80 （均为分析纯） 营养琼脂培养基，营养肉汤培养基，虎红琼脂培养基,甘露醇高盐琼脂培养基,麦康凯琼脂培养基（中国药品生物制品检定所） 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003] ，大肠杆菌[CMCC（B）44103] 1．3 金黄色葡萄球菌及大肠杆菌菌液的制备： 取一环金黄色葡萄球菌（大肠杆菌）菌苔置100ml营养肉汤培养基中，35℃培养18小时后，即得。 临用时，取1ml菌液用生理盐水稀释成每1ml中含活菌为50----100个/ml,作为供试菌液。 2、试验方法 2．1 对照稀释液 灭菌的0.9%生理盐水溶液(以下简称生理盐水) 灭菌的磷酸盐缓冲液（pH7.2以下简称缓冲液） ２．２　试验稀释液[100ml] 含30ml吐温-80和10ml液体石腊的无菌生理盐水 含1%吐温-80的无菌生理盐水 含5%吐温-80的无菌生理盐水 含10%吐温-80的无菌生理盐水 含1%吐温-80的无菌磷酸盐缓冲液 含5%吐温-80的无菌磷酸盐缓冲液 含10%吐温-80的无菌磷酸盐缓冲液 含20%吐温-80的无菌磷酸盐缓冲液 ２．３　供试液的制备 分别取马来酸曲美布丁原料（或片剂研磨后的粉末），分别加对照稀释液或上述各种稀释液各100ml，分别制成1：20的溶液，备用。 ２．４检查方法 按中国药典1995年版附录微生物限度检查法 ３、马来酸曲美布丁结晶析出试验 ３．１取用对照稀释液制成的供试液，按中国药典1995年版附录微生物限度检查法中的细菌总数的常规检查法进行试验，结果培养3-4小时开始在细菌和霉菌培养基表面有少量放线状物产生，继续培养16--18小时在上述培养基内或表面均有大小不等的放线状物或梭状物产生，取细菌培养皿内的放线状物或梭状物进行以下试验。 3．1．1 取上述放线状物或梭状物，接种至另一备妥的营养琼脂培养基平板上，培养18小时后，均无微生物生长。 ３．１．２ 用革兰氏染色法染色，镜检，均末发现有类微生物的形态。 3. 1. 3在显微镜下检视为放线状,树枝状或梭状的结晶（图1），与供试品的上清液置载玻片上自然风干后在显微镜下观察的结晶一致（图2）。 图1 4.1抑制结晶析出试验 图2 取2.3 项下的各供试液依法检查结果见下表1 表1 马来酸曲美布丁结晶析出结果 供试品 原料 制 剂 稀释液 盐水 盐水 缓冲液 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ 细菌培养基 ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋　 － － － － 霉菌培养基 ＋ ＋ － － － － － － － － - 表示无结晶析出; + 表示有结晶析出;±表示部分有结晶析出 吐温-80 对微生物生长的影响 吐温-80本身可作为片剂的辅料,无抑菌作用;中国药典1995年版附录微生物限度检查法已用作增溶剂;但我们仍进行了微生物生长的比较试验。 取缓冲液和稀释液（5）[含1%吐温-80]制成的马来酸曲美布丁1：20的供试液1ml分别置灭菌培养皿中，分别加入金黄色葡萄球菌菌液，大肠杆菌菌液1ml,按细菌总数的检查方法，用甘露醇高盐琼脂和麦康凯培养基培养18小时后，计数，结果（见表2，3）表明金黄色葡萄球菌，大肠杆菌的检出数是一致的，故认为1%吐温-80对微生物的检查无影响。 表2 金黄色葡萄球菌的检出试验 空白：0个 加入活菌数：118个/ml 试验号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ 平均 缓冲液组（个／ml） 112 118 107 120 101 98 129 106 １１１ ＋９　　 稀释液组（个／ml） 119 102 109 117 131 104 113 107 １１３ ＋８　　 表3 大肠杆菌的检出试验 空白：0