DNA复制是半保留的.pptVIP

16 DNA复制;12.1 DNA复制是半保留式的 12.2 DNA复制是双向进行的 12.3 DNA聚合酶III催化复制叉处的聚合反应 12.4 DNA聚合酶III同时催化两条链的合成 12.5 复制叉移动需要多蛋白复合物 12.6 DNA复制起始于细菌染色体上的唯一的一个部位 12.7 DNA复制终止于ter区 12.8 DNA复制的其它方式 12.9 损伤的DNA可以修复;遗传中心法则; Meselson- Stahl实验： 1、使E.coli在含有唯一氮源15N （15NH4Cl）的培养基中培养，合成的所有核苷酸都含有15N ，具有较高的密度，都整合到亲代DNA中。 2、将生长在15NH4Cl培养基的E.coli转移到含有唯一氮源，但密度较低的14N （14NH4Cl）培养基中培养。培养两代，并分别取每一代的DNA进行密度梯度离心。;首先在15NH4Cl培养基中培养;用15N标记的亲本DNA;（a）密度梯度离心的DNA带 （b）对应于左侧DNA带的解释; 从前面图可以看出，在含有14N氮源介质中培养一代的DNA经密度梯度离心后，DNA带位于在15N培养基中的DNA带的上面。 在含有14N氮源介质中培养两代后的DNA经密度梯度离心后，出现两条带，第一条带位置与培养一带的DNA带相同，另一条DNA带位于第一条带上面，说明第二条带密度更轻。 实验结果充分说明DNA复制是半保留复制。; 两种复制模式 （a）单向复制模式 （b）双向复制模式; 大肠杆菌染色体DNA双向复制模式;真核生物DNA复制有多个复制起点，同时双向复制; DNA合成时，核苷酸是通过酶催化加到一个正在延伸的DNA链上，这种酶要求一条完整的DNA链作为模板，去合成一条互补链，所以这样的酶叫做DNA指导的DNA聚合酶。 Arthur Kornberg（斯坦福大学医学院教授）等人从1955年开始寻找合成DNA的酶。于1956年在大肠杆菌的提取液中发现了DNA聚合酶。 Kornberg发现的DNA聚合酶就是现在的DNA聚合酶I，是分子量为109,000的一条多肽链，具有聚合活性及3ˊ-5ˊ外切酶活性，还有5ˊ-3ˊ核酸酶活性。以后又陆续发现了功能不同的另外几种DNA聚合酶，下表归纳了到目前为止从大肠杆菌和哺乳动物中发现的DNA聚合酶的基本特征。;见P414；其中；Klenow片段：; 聚合反应的基本过程都是通过新合成的链的3ˊ-OH对进入的新的核苷三磷酸（用d NTP）的?磷进??亲核攻击，导致磷酯键断裂，结果在链的3ˊ末端加上了一个新的核苷酸，即延长了一个核苷酸。 释放出的焦磷酸经焦磷酸酶水解有利于聚合反应的进行;双重核对功能：①DNA聚合酶的选择作用； ② 3’-5’外切酶的校对作用。 右图为“酶对底物的专一性的校正反应”。 [详见P414—415] ; 由于DNA的两条模板链是反平行的，又因为DNA总是沿5ˊ→ 3ˊ方向合成，即两条新链是沿着相反方向合成。换句话说，就是一条子链的合成方向与复制叉移动的方向一致，该子链称为前导链；而另一条子链与复制叉移动的方向相反，这条链称之为滞后链，但也是通过通过5ˊ→ 3ˊ方向聚合形成的。 12.4.1 在滞后链中DNA的合成是不连续的 根据岗崎实验，可以确定复制叉的一个“杈”（前导链）是沿5ˊ-3ˊ方向连续合成的，而另一条链（滞后链）是通过岗崎片段方式不连续合成的。连续和不连续合成的结合使得复制叉整体向一个方向延伸。;;前导链和滞后链的合成;12.4.2 每个岗崎片段的合成开始于一个RNA引物 不连续合成解释了滞后链是怎样合成的，但不能解释每个岗崎片段是怎样开始合成的。DNA聚合酶III不能从头开始进行聚合反应，它只能将核苷酸加到已有的多核苷酸链上。所以为了合成滞后链，需要在复制叉处合成一系列的短的RNA引物。每个RNA引物都是与滞后链模板部分互补的，而且在DNA聚合酶III催化下从引物 3ˊ端延伸形成岗崎片段。 RNA引物是通过引发酶合成的，引发酶是一个称为引发体的大的复合物中的成分，引发体还包括使DNA解旋的解旋酶和其它的一些辅助蛋白。引发酶每秒钟催化一个大约长10个核苷酸的RNA引物的合成。由于复制叉移动的速度大约为每秒1000个核苷酸，所以大约每1000个核苷酸就要合成一个RNA引物。 ;12.4.3 DNA pol I切去RNA引物，并使岗崎片段延伸;引发体;12.5 复制叉移动需要多蛋白复合体;解旋酶：是个需要ATP的酶，该酶刚好在移动的复制叉的前面沿着单链DNA滑动。E.col