金花茶查尔酮异构酶基因全长克隆与表达的初步研究 - 林业科学研究.pdf

林业科学研究　２０１２，２５（１）：９３ ９９ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　文章编号：１００１１４９８（２０１２）０１００９３０７ 金花茶查尔酮异构酶基因全长克隆与表达的初步研究 １，２ １ １ 周兴文 ，李纪元 ，范正琪 （１中国林业科学研究院亚热带林业研究所，浙江 富阳　３１１４００；２广西玉林师范学院，广西 玉林　５３７０００） 摘要：利用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＡＣＥ技术，从我国珍稀濒危植物金花茶花瓣中获得了查尔酮异构酶（Ｃｈａｌｃｏｎｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ， ＣＨＩ）基因的ｃＤＮＡ全长，命名为ＣｎＣＨＩ，ＧｅｎＢａｎｋ登录号 ＨＱ２６９８０５１。碱基序列分析表明，ＣｎＣＨＩ基因全长９５３ ｂｐ，包含５６ｂｐ的５’非翻译区、２０４ｂｐ的３’非翻译区和一个长为６９３ｂｐ编码２３０个氨基酸的开放阅读框。氨基酸 序列比对分析表明，ＣｎＣＨＩ基因编码蛋白与蔷薇科、杜鹃花科、茄科等植物的ＣＨＩ蛋白同源性都在７５％以上，与山 茶科山茶属茶树ＣＨＩ蛋白同源性高达９９％。相对荧光定量ＰＣＲ分析表明，ＣｎＣＨＩ基因在金花茶花蕾发育过程中 呈现先急剧上升后平缓下降的趋势；在花器官的不同部位中，ＣｎＣＨＩ基因表达量最高的是雌蕊，其次是雄蕊，在萼 片和花瓣中的表达量较低且相差不大。 关键词：金花茶；查尔酮异构酶基因；序列分析；相对定量ＰＣＲ；表达特性 中图分类号：Ｓ７１８４６ 文献标识码：Ａ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＣｈａｌｃｏｎｅＩｓｏｍｅｒａｓｅＧｅｎｅｃＤＮＡ ｆｒｏｍＣａｍｅｌｌｉａｎｉｔｉｄｉｓｓｉｍａ １，２ １ １ ＺＨＯＵＸｉｎｇｗｅｎ ，ＬＩＪｉｙｕａｎ，ＦＡＮＺｈｅｎｇｑｉ （１．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｆｕｙａｎｇ　３１１４００，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ； ２．ＹｕｌｉｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｕｌｉｎ　５３７０００，Ｇｕａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｃｈａｌｃｏｎｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ（ＣＨＩ）ｇｅｎｅｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｐｅｔａｌｓｏｆＣａｍｅｌｌｉａｎｉ ｔｉｄｉｓｓｉｍａｕｓｉｎｇｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＰＣＲａｎｄＲＡＣＥ，ｎａｍｅｄＣｎＣＨＩ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ． ＨＱ２６９８０５．１）．ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＣｎＣＨＩｉｓ９５３ｂｐｉｎｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈａｎｄｃｏｎｔａｉｎｓａ５′ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄｒｅ ｇｉｏｎ（５′ＵＴＲ）ｏｆ５６ｂｐ，ａ３′ＵＴＲｏｆ２０４ｂｐ，ａｎｄａｎｏｐｅｎｉｎｇｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）ｏｆ６９３ｂｐｅｎｃｏｄｉｎｇａ２３０ｐｒｅ ｄｉｃｔｅｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＳｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔＣｎＣＨＩｓｈａｒｅｄｍｏｒｅｔｈａｎ７５％ｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈ ＣＨＩｆｒｏｍｐｌａｎｔｓｏｆＲｏｓａｃｅａｅ，Ｅｒｉｃａｃｅａｅ，Ｓｏｌａｎａｃｅａｅａｎｄ９９％ ｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ．ＲｅｌａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＣｎＣＨＩｓｈｏｗｅｄｔｈｅｔｅｎｄｅｎｃｙｏｆａｓｈａｒｐｉｎｃｒｅａｓｅａｔｔｈｅｅａｒｌｙｓｔａｇｅａｎｄｔｈｅｎｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｌｏｗｌｙ； ｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｂｕｎｄａｎｃｅｉｎｃａｒｐｅｌｓ，ａｎｄｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｎｓｔａｍｅｎｓ，ｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｆＣｎＣＨＩｉｎｓｅｐａｌｓａｎｄｐｅｔ ａｌｓｗｅｒｅａｌｍｏｓｔａｔ