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2017-09-02 发布于天津
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bm-tff2 在毕赤酵母中的表达及鉴定

动物学研究 2010，Dec. 31(6): 565−569 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research DOI ：10.3724/SP.J.1141.2010.06565 Bm-TFF2 在毕赤酵母中的表达及鉴定 1,2,# 3,# 1 1 1 1,* 余果宇 , 张红芸 , 张勇 , 江萍 , 李文辉 , 张云 (1. 中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室, 云南昆明 650223; 2. 昆明医学院生物化学教研室, 云南昆明 650500; 3. 昆明医学院第一附属医院妇产科, 云南昆明 650032) 摘要：Bm-TFF2, 一种从大蹼铃蟾皮肤分泌物中分离得到的两栖类三叶因子, 具有比人三叶因子更强的生物学活性。该研究以Bm-TFF2 的cDNA 为模板, 利用PCR 方法扩增Bm-TFF2 基因, 然后插到含有AOX1 启动子和 α-因子信号肽序列的表达载体pPIC9K 中, 采用毕赤酵母表达系统进行分泌表达, 并用G418 筛选高拷贝整合转化子。SDS和Western blotting 都检测到Bm-TFF2 被分泌性表达于酵母上清。在1%的甲醇诱导表达不同时间后, 重组蛋白在72 h 的表达量最大, 可达50 mg/ L; 而不同浓度的饱和硫酸铵沉淀菌液上清时, 80%的饱和硫酸铵沉淀量最大。这些结果表明, 重组质粒 Bm-TFF2-pPIC9K 成功构建并在真核细胞中高效表达, 这为进一步研究 Bm-TFF2 的生物学活性及其结构与功能关系奠定了基础。关键词：Bm-TFF2; 毕赤酵母; 表达; 鉴定中图分类号：Q966; Q516; Q786 文献标志码：A 文章编号：0254-5853-(2010)06-0565-05 Expression and identification of Bm-TFF2 in Pichia pastoris YU Guo-Yu 1,2,#, ZHANG Hong-Yun 3,#, ZHANG Yong 1, JIANG Ping 1, LEE Wen-Hui 1, ZHANG Yun 1,* (1. Biotoxin Units, Key Laboratory of Animal Models and Human Disease Mechanisms, Kunming Institute of Zoology, the Chinese Academy of Sciences, Kunming 650223, China; 2. Biochemistry Section of Kunming Medical College, Kunming 650500, China; 3. Department of Obstetrics and Gynecology, the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650032, China)