分子生物学2009-2010-08-2-生物信息的传递-3转录后加工-rna拼接2.docVIP

教学单元教案格式 9 第3章 转录（之转录后加工- RNA拼接2） 课程教案 授课题目：第3章 转录 转录后加工-小RNA-RNA拼接1 第四周 第二次课 教学时数： 2 授课类型： 理论课 □ 实践课 教学目的、要求： 理解：真核生物mRNA前体的加工的意义和特征、RNA编辑的意义 掌握：内含子剪接的一般特征 了解：内含子的主要类型 核酶的功能和意义 教学重点： 重点阐明：内含子的剪接方式，较为详细的过程 重点指出：三类内含子的间接方式和化学本质 教学难点： 绝对难点：内含子的剪接方式 相对难点：无 教学方法和手段： 老师讲授为主：讲授 视频演示 PPT演示 讨论。以电脑幻灯片边演示边讲述为主，（白板课件）辅以板书（黑板板书） 学生回答问题为辅：（如时间等条件许可的情况下） 注：以下内容按实际需要进行取舍 要求有多媒体，因为信息量大，许多结构图需要媒体放映，效果才好 第讲RNA拼接尤其是mRNA内含子的剪接进行详细介绍。multiple introns may be spliced differently in different circumstances, for example in different tissues 1.RNA剪接(RNA splicing) 一个基因的外显子和内含子共同转录在一条原初转录产物中，将内含子去除而把外显子连接起来形成成熟RNA分子的过程。 RNA拼接的一般特点 内含子的分类，找重点的四种。：酵母tRNA I类内含子 Ⅱ类内含子 核mRNA前体 ★ Ⅰ类内含子（group Ⅰ）：含有中部核心结构的 细胞器基因 核基因 ★ Ⅱ类内含子（group Ⅱ）：不含有中部核心结构 细胞器线粒体基因内 核基因 ★ Ⅲ类内含子 （group Ⅲ）：具有 GU－AG 特征的边界序列 核基因mRNA前体 ★ tRNA基因的内含子： 均位于 tRNA 的反密码环上 四种内含子的边界序列各有一定共同的特征 内含子类型 5’拼接点 内含子 3’拼接点 剪接方式 化学本质 tRNA类 无保守序列 富含AU 无保守序列 蛋白酶参与 直接切割和连接 I类 U↓ 有可供识别的特异序列 G↓ 自我剪接 转脂反应 II类 ↓GUGCG AU↓ III（真核mRNA） ↓GU AG↓或者AC↓ 剪接装置复杂 2. 酵母tRNA RNA splicing tRNA splicing完整过程 1、链的断裂和连接是两个独立的过程 2、tRNA的内含子均位于反密码环的3’端 长14~16bp，其中含一段与反密码环互补的序列 反密码环处形成一个与成熟tRNA不同的构象 3、拼接酶系识别的就是这个二级结构 3 第一类内含子的剪接 I类的内含子的拼接特点： 1．5’ 拼接点和3’ 拼接点U↓… …G ↓ 2．内含子自身形成明显的二级结构 3．拼接属于自我拼接 ，由内含子本身完成，因为其具有酶的作用 拼接过程： 1、游离G发动的转酯反应，G 的 3’-OH 攻击内含子的 5’拼接点 2、exon A 的3’-OH 攻击3’拼接点，同时释放线状的内含子,形成成熟RNA分子 ? 两次转酯反应是紧密偶联的 ? 释放出的内含子可继续进行转酯反应 而形成环状 四膜虫的 35SRNA 的内含子有自身催化的性质 即 将一处已有的磷酸二酯键转变成另一处新的磷酸二酯键，不需要额外的能量。因此： 内含子可以看作是 RNA重排酶（RNA rearrangease）或 RNA异构酶（RNA isomerase） 其中： 拼接反应中，“酶” 和底物是同一个分子，且反应后变成了不同的分子 4 第二类内含子的剪接 第二类内含子的拼接 GUAU类 自我剪接 1、拼接点序列结构特征 拼接过程 5 第三类内含子的剪接 真核mRNA类的内含子GUAG类的 拼接位点的特征： 拼接机制（Splicing mehanism ) SnRNA (or ScRNA) 与拼接点序列间存在互补区域并参与剪接, 形成拼接体( spliceosome)。 Spliceosome 逐级组装， 不同的SnRNA（U1、U2、U5和U4／U6）分步替代与mRNA形成一个完整的拼接体 内部核心结构的分枝点上保守的A发动亲核攻击，发生两次转脂反应：第一次转酯－－左外显子、内含子剪切套索，第二次转酯－－exons连接、套索状内含子释放，剪接体解体与套索降解同步