盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度的最佳反应条件.pdfVIP

煮i oos， s s 文章编号：1003—4803(2008)03—0158—02 盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度的最佳反应条件来 张 弘，聂 玲 (辽宁省铁岭市种子管理站，辽宁铁岭 1 12000) 中图分类号：S513．01 文献标识码：B 玉米种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 缓冲液的pH值时，可用乳酸原液经稀释后再调 方法应用越来越广泛，根据多年的操作经验，我们 节的方法更为有效 汇总出如下技术要点，供同行参考。 2 电泳操作 1 溶液配制技术要点 样品提取：(1)取样要有代表性，随机取样， 1．1 所用化学试剂应为分析纯或合格的化学纯， 不取特大、特小粒、霉烂粒、虫蛀或病粒种子，以免 该方法属生化方法，需用化学试剂配制多种操作 影响检验结果，谨记随机取样。(2)取样量要根 溶液，化学试剂的纯度和质量直接影响到所配溶 据纯度标准而定，一般为 100粒，若纯度要求太 液的浓度，进一步影响到实验结果。例如：如果丙 高，应增加取样量，如测定纯度99．0％的自交系， 烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的纯度不够，在水中难 要求取样不少于299粒。(3)注意样品间的交叉 以完全溶解，造成凝胶浓度降低，就会影响凝胶强 污染在单粒粉碎种子样品时，每粉碎一粒种子，应 度。因此，应购买分析纯试剂来配制溶液。若不 将粉样器上的种子粉末擦净，防止前粒种子的粉 易买到分析纯，应注意购买大厂生产的合格的化 末污染下一粒种子，造成结果不准。(4)蛋白质 学纯试剂，并根据其溶解度的好坏适当增加试剂 提取应充分彻底。样品粉碎后，加人提取液的量 比例。 要保持一致，加人后要充分摇匀，放置 10 min后 1．2 注意个别试剂容易失效变质本方法中使用 再摇一次，以保证种子中的盐溶蛋白提取完全。 的硫酸亚铁和坏血酸都是还原性试剂，它们可以 否则，会出现电泳谱带不清或缺失谱带。 通过氧化还原反应将凝胶溶液中的氧消除掉，以 提取时间不宜太长或太短，太短提取不彻底； 提高凝胶的速度和效果。但是，如果硫酸亚铁和 太长会由于蛋白质盐析作用发生沉淀或变性，造 抗坏血酸试剂放置时间过长或密封不好，很容易 成谱带丢失，一般以30—240 min为宜，若样品稀 被氧化变质，失去对凝胶的催化作用，导致凝胶不 缺，应将提取液马上移至冰箱，可保存两天时间仍 凝固或凝胶效果不好；过氧化氢是聚丙烯酰胺凝 有实验价值，再次电泳时，只需将样品重摇一次， 胶形成的引发剂，它也容易在高温或光照下分解 但易出现谱带不明显、颜色淡、带区缺失、主谱带 而变质；乳酸钠和乳酸溶液在高温下极易受微生 特征区不清晰等缺点。 物的作用而变质沉淀；另外，凝胶溶液也会在光照 3 凝胶制备技术要点 条件下发生聚合。因此，购买试剂时应注意其产 地、厂家、生产日期和密封情况。配制好的溶液应 3．1 胶室要干净平整 装在棕色瓶中放冰箱低温保存，凝胶液应在两周 电泳凝胶是在两块玻璃板组成的胶室中形成 内使用，其他溶液町保存两个月。 的，灌胶前要求将玻璃板充分洗净、擦干。否则， 1．3 各溶液应严格按配方配制在配制各种溶液 电泳凝胶会