重组人p53腺病毒注射液联合放射治疗对人淋巴瘤细胞的抑制作用.pdfVIP

第26卷 第3期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vo1．26．NO．3 2008年6月 J．Radiat．Res．Radiat．Process． June2008 重组人 p53腺病毒注射液联合放射治疗 对人淋巴瘤细胞的抑制作用 俞泽阳 ，2范 我2吴锦昌 李栋庆2朱 然2万建美2王永青2 (苏州大学第二附属医院 苏州215004) (苏州大学放射医学与公共卫生学院 苏州 215123) (南京医科大学附属苏州市立医院 苏州21 5001) 摘要 本研究利用四氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法、激光共聚焦型显微镜扫描技术和流 式细胞术分析重组人p53腺病毒注射液(商品名今又生，rAd-p53注射液)对人淋巴瘤细胞的抑制作用及其辐 射增敏性。结果表明，rAd-p53对淋巴瘤细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性效应，但其抑制效应不明显均 未达到有效抑制率。放疗及联合治疗后，细胞抑制率及凋亡率明显增高，形态和周期均发生变化，但两者直 接差别不显著。以上说明rAd．p53对人淋巴瘤细胞的转染率还有待进一步提高，以增强细胞对辐照的敏感性。 关键词 基因治疗，rAd-p53，放射治疗，人淋巴瘤细胞 中图分类号 R811．5，R730．5，R551．2 基因治疗联合放射治疗代表了肿瘤治疗的一种 科学院上海细胞所，Daudi由苏州大学基础医学系 新策略。p53基因是目前公认的与人类关系最为密 免疫教研室馈赠。试剂：重组人p53腺病毒注射液 切的抑癌基因，在人类肿瘤的发生发展及机体组织 (rAd．p53注射液，商品名今又生，产品批号 细胞的生长发育分化等过程中起重要作用。由于其 由深圳市赛百诺基因技术公司提供，规 在细胞周期调控、抑制细胞生长、诱导肿瘤细胞凋 格：lxl0 vp／支，分装后冻存。RPMI1640购自 亡、肿瘤治疗等方面的重要作用故被称为“基因组 GIBCO公司，新生牛血清购自杭州四季青生物工 卫士”…。重组人p53腺病毒注射液(Recombinant 程材料有限公司。四氮唑盐 (Methyl thiazolyl adenovirus encoding human p53 tumor suppressor tetrazolium，M丌 )、十二烷基硫酸钠 (Sodium gene，rAd—p53注射液，商品名Gendicine．今又生) dodecyl sulfate，SDS)购自Sigma公司。凋亡试剂 已由国内研制成功，是由改构的5型腺病毒作为载 盒购 自联邦生物技术有限公司。吖啶橙 体，携带正常人肿瘤抑制基因p53重组而成。目前 (Acridineorange AO)、溴乙啶(Ethidiumbromide， 该药物对肿瘤细胞的研究多见于头颈部鳞状细胞癌 EB)染料，两者终浓度为 5~tmol／mL；碘化丙啶 及肺癌的报道，而对淋巴瘤细胞的研究还未见报道。 (Propidiumiodide，PI)染料，其终浓度为50~tg／mL， 本课题应用该药物联合放疗，观察其对不同放射敏 均购自Sigma公司。主要仪器：TCS．SP2型激光共 感性的人淋巴瘤细胞株Raji和Daudi的抑制作用． 聚焦型显微镜 (Laser confocal scanning microscope， 两者均来源于B淋巴细胞，并含有突变型p53基因， LCSM，Leica Co，Germany)，COULTER EPICS 其中后者为辐射抗性细胞【2j。 FC500型流式细胞仪 (BackmanCoulter，USA)，