HRP 标记试剂盒 HRP Labeling Kit.PDFVIP

1 2 第 页 共 页 HRP标记试剂盒 HRPLabelingKit 货号 HRP量 可标记抗体量 最佳反应体积 BF06095-1000 1mg 1-4mg 1ml BF06095-5000 5mg 5-20mg 5ml 成分： 名称 保存条件 备注 HRP （已活化） 4℃ （勿冻结） 4mg/ml，1mg/支，每支可标记1-4mg抗体 标记缓冲液 4℃ 标记终止液 （冻干粉） 4℃ 用前用水溶解至2.5mg/ml 标记物保存液 4℃ 有效期12个月 （HRP有效期6个月）。 产品描述 本试剂盒采用改良的碘氧化法活化辣根过氧化物酶 （HRP），经过氧化以后活化的HRP 可以与待标记物的游离氨基结合，发生希夫碱反应 （SchiffsBaseReaction）。本品本试剂盒 适用于带有游离氨基的物质的标记，比如：带有游离氨基 （伯胺）的小分子化合物，蛋白或 抗体。 使用方法 1. 实验前准备 （从4℃中取出HRP标记试剂盒，室温条件下平衡30分钟） 准备标记物：待标记物以0.01M PBS （pH7.4）为佳，不含有甘油、叠氮钠、氨基物质 （包括甘氨酸、Tris等）、硫酸铵、EDTA等物质。如果待标记抗体含有以上物质，需用0.01M PBS （pH7.4）缓冲液进行充分透析或超滤管超滤，以除去以上物质，保证标记效率。调整 北京博奥龙免疫技术有限公司 Tel:010 QQ:473644017 2 2 第 页 共 页 待标记物的浓度至适当浓度，抗体调整到浓度0.5-5mg/ml；对于小分子物质，需要摸索浓度， 保证HRP的比例过量。如果不能确保HRP过量，标记完之后最好透析或过滤除去未标记的小 分子物质。 2. 标记反应 向待标物的溶液中加入1/10体积的标记缓冲液，用移液器反复吹打几次以充分混匀，避 免产生气泡；将以上待标记溶液加到HRP管中，用移液器反复吹打几次以充分混匀，避免产 生气泡，室温避光反应3hrs。 3. 标记反应终止 将反应终止液干粉管中加入1ml去离子水配成反应终止液 （2.5mg/ml），取适量的反应 终止液加入步骤2的标记反应管中，比例为每10µl反应液加入1µl反应终止液。充分混匀，室 温放置1hr。 4. 标记物产物收集与保存 终止完成后，加入等体积的标记物保存液，充分混匀，置于-20℃保存。 Trouble Shooting 问题 原因 方法 1）抗体溶液中残留了游离氨基 1）进一步透析 标记后抗体效价低 2）显色系统失效 2）先确认显色系统工作正常 3）有些抗体较脆弱，酶标后易失活 3）采用其他方法标记 北京博奥龙免疫技术有限公司