高中生物2.2.2-动物细胞融合与单克隆抗体.pptVIP

思考下列问题： 1、什么叫动物细胞融合？植物体杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢？ 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？ 细胞融合与诱导细胞融合物质： 二、单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体的关系： 单克隆抗体 技术原理 1）单个B淋巴细胞产生单一抗体（但不能无限增殖） 2）肿瘤细胞能无限增殖（但不能分泌单一抗体） 3）细胞融合技术杂交瘤细胞（既无限增殖又分泌单一抗体） 4）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞（获取大量单克隆抗体） 2.单克隆抗体制备过程 （1）小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ （2）制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？ （3）在整个制备的过程中要经过几次筛选？ 3.单克隆抗体的应用： 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。 * 一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 动物细胞融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 融合 组培 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 动物细胞A 动物细胞B 杂种细胞 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 1.概念： 2.结果： 3.原理： 4.诱导方式 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程（细胞杂交）。 形成单核的杂交细胞 细胞膜的流动性 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 动物细胞融合 诱导因素：仙台病毒、聚乙二醇、电激诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。 思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。丧失感染性保留融合活性。 细胞融合技术应用于哪些方面？ 细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 主要用途 诱导方法 使用的酶 细胞融合原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理（离心、振荡、 电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 浆细胞产生抗体。 　　１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体（浆细胞产生抗体）。 　　２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 　　３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 所以传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？ 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。 　 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点： 特异性强、灵敏度高 思考： 1、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 3.整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。 注射抗原 效应B细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基 筛选1 抗原-抗体杂交法 克隆化 单克隆抗体 筛选2 1.注射抗原的目的是什么？ 注射抗原 效应B细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基 筛选1 抗原-抗体杂交法 克隆化 单克隆抗体 筛