实验十三 转化子鉴定.docVIP

实验十三 转化子的鉴定 一．原理 采用煮沸法快速提取阳性克隆质粒DNA，对提取的DNA电泳鉴定对与设计大小一致的质粒DNA进行目的DNA片段PCR扩增，对扩增产物进行电泳．若扩增产物中出现特异条带，则可初步确定所得到的转化子力含目的基因的克隆。 (一)煮沸法快速提取质粒DNA 1.取一张白纸，剪成培养皿大小，打上小格，每个小格标上号．贴在盛LB培养基的培养皿上。将散落在转化培养皿上白色菌落(蘸色菌落中载体质粒一般未插入片段)，分别接种到每一小格中，37℃培养过夜。 2.用已灭菌的扁平牙签，按种编好号的白色苗落的细菌至相应编号的含氨苄青霉素的LB液体培养基试管5ml／15ml中，于37℃剧烈振摇下培养过夜。 3.将1．5ml培养物倒人1．5ml微量离心管中，用微量离心机于4℃以12 000 r／min离心30s，将剩余的培养物贮存于4℃。 4.吸去培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。 5.向含细菌沉淀的微量离心管中加入350μl STET，重悬菌体 6.加25μl新配制的10mg／ml溶菌酶溶液，振荡3秒钟以混匀之 7.将离心管放人煮沸的水浴巾，时间恰为10s。 8.用微量离心机于室温以12 000 r／rain离心10mm。 9.用无菌牙签从微量离心管中去除细菌碎片。 10.在上清液加入40μl 5