种异体心脏移植免疫耐受的实验研究.ppt

同种异体心脏移植免疫耐受的实验研究 博士生：郭宏伟 导师：吴清玉教授 中国协和医科大学 阜外心血管病医院 中国医学科学院 心血管病研究所 背 景 心脏移植是治疗终末期心脏病的有效措施 心脏移植面临的问题 诱导供体特异性免疫耐受是解决问题的关键 探讨免疫耐受的诱导方式及其可能机制 第一部分：建立大鼠腹部心脏移植模型 实验动物 纯系雄性DA大鼠（RT1a），250?300g 纯系雄性LEW大鼠（RT11），250?300g 北大医学部实验动物中心提供 供心的获取 腹部心脏移植模型 实验分组 检测项目 移植心平均存活时间（MST） 移植心组织学检查 应用SPSS10.0软件进行统计学分析 实 验 结 果 同种大鼠同基因和异基因移植心存活时间比较 移植心组织学检查 Ⅰ组未见炎细胞浸润，无实质细胞坏死（HE染色） 讨 论 1969年Ono建立腹部心脏移植模型 80年代初国内陈忠华首次应用 本研究采用Ono模型，并加以改进 围术期处理 注意供心的保护 减少麻醉药用量 阻断血管要确切 吻合口大小要匹配 熟练的吻合技术 尽可能使手术无菌 注意保温 结 论 该模型简单、经济、稳定性强、重复性好 同种异基因移植心于7.33?1.03天丧失功能 DA、LEW大鼠品系纯正，适于移植的基础研究 第二部分：多次输注供体脾细胞联合应用环磷酰胺诱导大鼠心脏移植免疫耐受的研究 实 验 方 法 实验分组 第一组：未处理组 第二组：SC组 分五组 第三组: CP组 第四组：SC+CP组 第五组：SC+CP+SCip组 检测项目 移植心平均存活时间（MST） 单向混合淋巴细胞反应（MLR） 外源性IL-2对耐受组MLR的影响 体内过继转移实验 体外细胞转移实验 胸腺及脾脏嵌合体分析 实 验 结 果 移植心存活时间 混合淋巴细胞反应（MLR） 外源性IL-2对耐受组MLR的影响 注: ?与耐受组相比，P?0.05；与对照组相比，P?0.01 体内细胞转移实验 体外细胞转移实验 注：?与对照组相比，P?0.05 脾脏及胸腺嵌合体分析 移植心组织学检查 讨 论 是一种广泛应用的耐受诱导方案 SC可刺激供体抗原反应性的细胞克隆活化增殖 CP使增殖的母细胞选择性破坏 可诱导主要MHC完全不同的大鼠心脏移植的短期耐受 SC+CP+SCip方案可诱导主要MHC完全不同的大鼠心脏移植的长期耐受 SC+CP+SCip方案诱导免疫耐受的可能机制 MLR表明耐受具有供体特异性 IL-2可部分逆转MLR的低反应状态，说明克隆删除和克隆破坏是耐受的机制之一 体内和体外细胞转移实验表明耐受大鼠中存在免疫抑制细胞 胸腺和脾脏嵌合水平分析表明中枢和外周嵌合体的存在是免疫耐受的机制之一 结 论 SC+CP+SCip方案，可成功诱导主要MHC完全不同的同种大鼠心脏移植的长期耐受 SC+CP+SCip方案诱导的耐受程度较SC＋CP方案进一步加深 该方案诱导的免疫耐受具有供体特异性 免疫耐受产生机制与下列因素有关 ⑴.克隆不应答和克隆删除 ⑵.免疫抑制细胞的存在 ⑶.中枢和外周嵌合体的存在 第三部分：联体共生诱导大鼠心脏移植免疫耐受的研究 实验目的 嵌合体与心脏移植免疫耐受的关系 嵌合体诱导免疫耐受的可能机制 Th1/Th2细胞因子表达水平与移植耐受之间的关系 实 验 方 法 建立联体共生模型 耐受诱导方案 第0天 供受体腹腔注射环磷酰胺80mg/kg（CP1） 实验分组 检测项目 联体15天供受体脾脏、胸腺的嵌合水平 移植心平均存活时间(MST) 心脏移植后脾脏及胸腺嵌合体分析 单向混合淋巴细胞反应(MLR) 外源IL-2对耐受组大鼠MLR的影响 体外过继转移实验 移植心组织学检查 受体脾脏及移植心Th1/Th2细胞因子IL-2、IFN-?、IL-4、IL-10 mRNA 的表达水平 实 验 结 果 联体15天供体嵌合体的测定 联体15天受体嵌合体的测定 移植心存活时间 心脏移植后脾脏嵌合体分析 心脏移植后胸腺嵌合体分析 单向混合淋巴细胞反应(MLR) 注：?:与对照组相比，P?0.01；??:与对照组相比，P?0.05 外源性IL-2对耐受LEW大鼠MLR的影响 注: ?与耐受组相比，P?0.05；与对照组相比，P?0.01 体外过继转移实验 注：?与对照组相比，P?0.05 移植心组织学检查 受体大鼠脾脏中Th1细胞因子IL-2、IFN-? mRNA的表达水平 受体大鼠脾脏中Th2细胞因子IL-4 、IL-10 mRNA的表