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实时定量PCR - Meridian Life Science
实时定量 PCR
SensiFAST™ Probe (cDNA/DNA 模版)
优化的实时定量抗体介导热启动DNA聚合酶PCR 反应预混液和探针检测技
术。适用于各种常规实时定量PCR设备。 试验步骤和提示
以下是为TaqMan®探针PCR检测而设计的方案。对
于任何特定的实时定量PCR扩增，其产量和效率与
快速抗体介导热启动 探针和引物的序列，浓度，以及扩增子的长度密切
• 95°C ，1 分钟活化 相关。
• 针对标准的实时定量PCR仪器的快速循环模式而优化。 • 扩增子: 最佳扩增子长度应为80-200bp，并且
不超过300bp
优化的缓冲系统
提供经优化的2倍反应预混液，包括超高纯度的核苷酸，氯化镁和增强子。包 • 引物: 引物的熔融温度（Tm）应约为60℃；探针
括或不包括ROX。 TaqMan®探针不包括在内。 的Tm应高于引物大约10℃。
适用于 • 引物浓度: 9000nM 的引物最终浓度适用于大
• 多重PCR 多数基于探针的PCR反应，但是，建议采取0.2-
• 高通量测定 1μM间隔的梯度稀释来选定最佳浓度。正反引
物应采用相同浓度
• 快速循环条件（40分钟）
• 高敏感性和特异性扩增，即使对于困难的模板（高GC含量 55 ％） • 探针浓度: 200nm的最终探针浓度适用于大多
• 非常适合低拷贝数模版 数反应;建议最终探针浓度至少比引物浓度低
• 有效扩增- 96 ％的PCR效率
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