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第十三章 血栓与止血检验;一、基本理论;;;血浆血管性血友病因子抗原vWF:Ag，ELISA法; vWF:Ag 操作; vWF:Ag 操作;参考值： 61.6%～126.6% 注意事项 对血浆vWF：Ag浓度过高的标本，应稀释后再测定。 所有ELISA测定中应注意的事项均应引起重视。 除本方法外，也可以采用胶乳增强免疫比浊法。 ; vWF:Ag 应用评价; 凝血酶调节蛋白，TM ; TM 操作; TM是由血管内皮细胞合成和分泌释放的，它表达于血管内皮细胞表面，和循环血液中的凝血酶形成1：1的TM-凝血酶复合物，此复合物将蛋白C（PC）激活为活化蛋白C（APC），APC有灭活FⅧa、FⅤa和激活纤溶活性的作用，因此TM对于血管的抗凝作用十分重要。正常情况下，血浆中TM的含量很低，但当血管内皮受损后，血浆中的TM含量明显升高且与内皮的损伤程度相关。目前认为，TM:Ag的检测是了解血管内皮损伤最好的指标。 TM:Ag的水平升高 见于血栓性疾病，如糖尿病、心肌梗死、脑血栓、深静脉血栓形成（ DVT）、DIC等。;TM 注意事项;血浆6-酮-前列腺素F1α检测;血浆6-酮-前列腺素F1α检测 操作步骤;血浆6-酮-前列腺素F1α检测 参考区间;血浆6-酮-前列腺素F1α检测 应用评价; 了解血小板的超微结构，在此基础上理解血小板的止血功能。 理解并掌握血小板止血功能实验室检查的临床应用及评价。 ;一、基本理论;;1．血小板表面结构 由血小板膜、细胞外衣和开放管道系统（open canalicular system，OCS）组成。 重要成分：磷脂酰丝氨酸 （phosphatidylserine，PS）/血细胞第3因子（PF3） 血小板膜糖蛋白等。 2．溶胶质层结构 由微管、微丝、致密管道系统等组成。 3．细胞器内含物结构 主要致密颗粒和α-颗粒、溶酶体组成。 ;花生四烯酸是膜磷脂代谢产物，其代谢途径是血小板发挥聚集止血功能的主要代谢基础。;;;血小板功能的实验室检查;血小板粘附实验 PAdT，玻珠柱法; PAdT 操作;血小板粘附率（%）= ×100% 参考值：62.5% ± 8.6 % 注意事项 取血过程必须顺利，掌握血液通过玻珠柱的速度。 待用玻珠柱应置于干燥器中储存，受潮后粘附率下降。 血小板计数要准确，宜作2～3次后取平均值。 ; PAdT 应用评价; 血小板聚集实验 PAgT; PAgT 操作;不同仪器及诱聚剂或者不同浓度、剂量的同种诱聚剂有不同的参考范围。 MG-196型血小板聚集仪为例，几种常用的诱聚剂测得的参考值:;; PAgT 应用评价;PAgT 注意事项;血小板第3因子有效性测定（PF3aT;PF3aT 操作步骤; PF3aT 参考区间; PF3aT 应用评价;血小板膜糖蛋白测定;; 血小板自身抗体测定; 血小板相关抗体测定的应用评价;血小板寿命测定;血小板寿命测定的临床意义; 了解血液中凝血因子及机体凝血机制的基础理论。 理解并掌握凝血因子实验室检查的临床应用及评 价。 ;一、基本理论;;1．内源凝血途径 因子Ⅻ 因子Xa 固相激活：因子与带负荷的物质如体内的胶原、微纤维等以及体外的玻璃、白陶土等接触后，构型发生改变而被激活为Ⅻa。 液相激活：因子Ⅻa在辅因子HMWK的参与下，水解PK使之被激活为K，K又可反馈激活因子Ⅻ，生成大量的Ⅻa。 ;2.外源凝血途径 因子Ⅲ 因子Xa （1）因子Ⅲ（TF） 是一种跨膜糖蛋白，作为因子Ⅶ的受体，可与因子Ⅶ或Ⅶa结合，启动外源凝血途径。 （2）因子Ⅶ的激活 当TF结合到因子Ⅶ后，因子Ⅶ的构型发生改变随之被凝血酶、Xa激活为Ⅶa。因子Ⅶa与TF、Ca2+形成Ⅶ-TF- Ca2+复合物，其形成所需时间很短，一般不超过10秒。Ⅶ-TF- Ca2+复合物可激活因子X和因子Ⅸ，使内源与外源凝血途径相联通，具有重要的生理和病理意义。 ;3.共同途径 因子Ⅹ 纤维蛋白 （1）凝血活酶的生成 ① 因子X的激活：复合物Ⅶ-TF- Ca2+和Ⅸa-Ⅷa- Ca2+ -PF3均 可激活因子X生成有活性的因子Xa。 ② 因子V的激活：在少量凝血酶的作用下，因子V被激活为Va。 ③ 磷脂的作用：主要指血小板膜脂质双层中的磷脂酰丝氨酸 （PF3）。它提供反应的催化表面。 上述因子共同作用形成