04 实验四 植物DNA提取和纯度浓度鉴定.ppt

植物DNA的提取与鉴定; 实验原理; 实验原理;①在核蛋白溶液加入氯仿－异戊醇，振荡，使蛋白质乳化变性，再离心除去变性蛋白质。 ②用十二烷基硫酸钠（SDS）等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从材料中提取出DNA。 ③用苯酚处理，然后离心分层，蛋白变性后则停留在酚层内。;① 化学因素 核酸在pH4.0～11.0稳定， 否则就变性降解。 ② 物理因素 DNA是长链线状分子，强机械作用会使DNA分子断裂。 ③ 酶的作用 DNA酶会降解DNA分子。; 紫外光吸收法鉴定DNA纯度和浓度; 实验步骤;10mL CTAB分离缓冲液加入50mL 离心管中，在65℃水浴中预热。 取剪碎的植物叶片适量，置于预冷的研钵中，倒入液氮，尽快将叶片研碎。 将约1g叶片粉末加入预热的CTAB分离缓冲液中，轻轻转动混匀，65℃保温30分钟。 加10mL氯仿-异戊醇（24：1），轻轻混匀。 室温，4000 rpm离心10分钟。;用一开口较大的滴管将上层???相吸入另一干净的50mL离心管中，加入等体积的异丙醇，轻轻混匀，使核酸沉淀下来 用玻璃棒将丝状DNA搅起，转移至10mL 70％乙醇中，浸泡洗涤10分钟 用玻璃棒取出DNA沉淀，室温下干燥 将DNA沉淀溶于0.5 mL TE缓冲液中;DNA纯度和浓度鉴定;试 剂;CTAB分离缓冲液; CTAB;异丙醇 氯仿-异戊醇（24：1） 液氮 70%乙醇;TE 缓冲液;思考题