实时荧光定量PCR技术的类型特点与应用.pdfVIP

中国畜牧兽医 　2008 年第 35 卷第 3 期 生物技术 ·27 · 实时荧光定量 PCR 技术的类型 、特点与应用 袁亚男 ,刘文忠 ( 山西农业大学动物科技学院 ,太谷 　03080 1) 摘要 :实时荧光定量 PCR 技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术 ,具有高度的灵敏性 、特异性和精确性 。 该技术根据荧光作用方式分为 :SYBR 荧光染料法 、TaqMan 技术 、分子信标和复合探针等类型 ,依据其各 自优缺点可将各技 术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中 , 以期得到最优的定量检测效率 。 关键词 :实时荧光定量 PCR 技术 ;荧光共振能量转移 ;荧光探针 ;淬灭探针 中图分类号 :S813 . 3 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 :167 17236 (2008) ( 　　实时荧光定量 PCR 技术 realtime fluore s 成线性关系 ,从而得出产物的扩增曲线 。理想的扩 cence quantit ative PCR , R TFQ PCR) 是 1996 年由 N ( 增曲线应为J 型 ,符合 2 方程 其中N 为 PCR 的循 美国App lied Bio sy st em s 公司推出的一种新技术 , ) 环次数 ,但实际上扩增曲线为 S 型 。在 PCR 反应 它不仅实现了 PCR 从定性到定量的飞跃 ,而且与常 早期 ,不能将产生荧光的水平与背景明显区别 ,之后 规 PCR 相比, 具有灵敏度高 、特异性强 、有效解决 荧光的产生进入指数期 、线性期和最终的平台期 ,因 PCR 污染问题 、自动化程度高等特点 。作者综述了 此可以在指数期的某一点上检测 PCR 产物的量 ,并 实时荧光定量 PCR 技术的基本原理 、主要类型、特 由此推断起始模板含量 。 点及其在畜牧兽医领域的应用 。 实时荧光定量 PCR 的标准扩增 曲线如 图 1 。 1 　实时荧光定量 PCR 技术的基本原理 其中 Rn + 表示每点测量的荧光强度 ,代表反应管含 所谓实时荧光定量 PCR 技术 ,是指在 PCR 反 应体系中加入荧光基团 ,利用荧光积累实时监测整 有模板 DN A ;Rn - 表示荧光基线强度 ,代表反应管 个 PCR 进程 ,最后通过标准曲线对未知模板进行定 不含有模板 DN A ,其在理想情况下是一条平线 , 只 Δ 量分析的方法 。该技术结合了实时定量 PCR 仪 、实 具有背景荧光数值 ; Rn 的值表示 PCR 过程中 ,探 ( ) 时荧光定量试剂 、通用电脑和 自动分析软件 , 构成 针降解的量 ,也即 PCR 产物的量 。基线 ba seline PCRDN A/ RN A 实时荧光定量检测系统 。 是背景曲线的一段 ,范围为从反应开始不久荧光值 荧光探针技术