番茄果胶酶活性的测定.docVIP

实验三 番茄中果胶酶活力的测定一、实验原理番茄中的果胶酶系相当复杂，它主要包括聚半乳糖醛酸酶（PG）和果胶酯酶（PE）两类。聚半乳糖醛酸酶能催化果胶降解，导致果胶溶液粘度下降。因此，可通过测定酶催化反应体系粘度下降的速度来测定它的活力，果胶酯酶能催化果胶分子中半乳糖醛酸单位上的酯键水解，产生游离的羧基和甲醇，导致果胶溶液的pH下降，因此可以用pH—stat法测定它的活力。试剂和仪器试剂：20%氯化钠溶液、0.05mol/L 醋酸-醋酸钠缓冲液 pH4.5（Ⅰ）、1%果胶溶液 pH4.5、0.5mol/L 醋酸-醋酸钠缓冲液 pH4.5（Ⅱ）、1mol/L 氯化钠溶液、0.1mol/L 氢氧化钠溶液（准确标定）、0.05mol/L 氢氧化钠溶液仪器：组织捣碎机、抽滤装置、水浴锅、秒表、常规玻璃仪器、奥氏粘度计、pH计实验步骤酶液的制备300g番茄 + 100mL20%氯化钠溶液 ↓ 匀浆 ↓ 离心（4℃,10000rpm，20min） ↓ˉˉˉˉˉˉˉˉˉˉ↓ 沉淀 上层清液 ↓ 抽滤，量取清液体积 ↓ˉˉˉˉˉˉˉˉˉˉ↓ 沉淀 酶液Ⅰ ↓ 按516g硫酸铵/L酶液（80%的硫酸铵饱和度）