实验九_卵磷脂的提取与鉴定.pptVIP

实验九 卵磷脂的提取、纯化和鉴定 一、实验目的 1、学习和掌握卵磷脂的提取和鉴定方法； 2、掌握薄层层析的原理、方法和应用。 是细胞膜磷脂双分子层的重要成分。 卵磷脂又称磷脂酰胆碱，是甘油磷脂的一种。在动植物体内均有分布，在动物的脑、精液、心、肝、肾上腺和卵细胞中含量较多，蛋黄中含量可达8-10％。 其结构式为： 二、实验原理（一）卵磷脂的提取和纯化 磷脂易溶于乙醚、苯、氯仿，部分溶于乙醇，极难溶于丙酮；卵磷脂溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂，但不溶于丙酮；丙酮能够溶解油脂和游离脂肪酸、甘油三酯等。 因此，本实验用乙醇、乙醚为溶剂，丙酮为沉淀剂，干燥后获得卵磷脂。新提取得到的卵磷脂为白色蜡状物，与空气接触后因所含不饱和脂酸被氧化而呈黄褐色。卵磷脂中的胆碱，在碱性溶液中可分解为三甲胺，而具有特异的鱼腥味，可用于鉴定。 三、实验材料、仪器和试剂 （一）卵磷脂的提取和纯化 1、实验材料：鸡蛋黄 2、仪器：恒温水浴锅 蒸发皿 漏斗 磁力搅拌器 天平 3、试剂： 95％乙醇 乙醚 丙酮 （二）卵磷脂的薄层层析 1、实验材料：提取的卵磷脂 2、仪 器： 电热鼓风干燥箱、 层析玻璃板、 层析 缸、吹风机、小型喷雾器 。 3、试 剂： （1）硅胶-G； （2）0. 2%羧甲基纤维素钠溶液； （3）展层剂 ：氯仿∶甲醇∶水(65∶25∶4) ； （4）显色剂：1% 碘液。 四、实验步骤（一）卵磷脂的提取 1、卵磷脂的粗提 蛋黄10g放入洁净的带塞三角瓶中，加入95%乙醇40ml，搅拌15min后，静置15min；然后加入10ml的乙醚，搅拌15 min后，静置15min；过滤；滤渣进行二次提取，加入乙醇与乙醚(体积比为3：1)的混合液30ml，搅拌、静置一定时间；第二次过滤，合并二次滤液，加热浓缩至少量，加入一定量丙酮除杂，卵磷脂即沉淀出来，即得到卵磷脂粗品。 1、调浆：称取硅胶-G 4.5g →烧杯→ 12ml 0. 2%羧甲基纤维素钠溶液→用玻璃棒调匀搅拌为浆状液。 2、涂布：取洁净、干燥玻璃板一块→下衬一张白纸→在桌面上放平→用烧杯将浆状物均匀倒在玻璃板上，从一端开始，保持均匀一致，涂布面积1 ～4/5 。 3、干燥：在室温下凉干2分钟→60℃干燥箱烘30分钟。 4、活化：将干燥箱升温至120 ℃ ，活化30分钟后，关闭电源，当玻璃板面温度降至不烫手时取出。 五、实验结果 * * * * * * * * * * * * 2008年12月 胆　碱 HO 物质提取、纯化受到多种因素的影响，如抽提物的种类及其配比、抽提条件（温度、时间等）都能影响提取的结果。这种多因素的试验可以通过正交法，即用一特制的表格—正交表来安排试验，计算和分析试验结果。这样就能通过少量试验取得较好的效果。 本实验运用正交法抽提物的种类及其配比、时间温度和料液比这4个因素对卵磷脂提取和纯化的影响，并求得在什么样的条件下可以达到最佳的试验效果。 正交法实验设计 1∶6 30 60℃ 3∶1 3 1∶5 20 25℃ 4∶1 2 1∶4 10 4℃ 5∶1 1 料液比 时间（min） 温度 [乙醇]∶ [乙醚] 影响因素 水平 表1 抽提物、温度、时间和料液比4因素3水平 表3 L9 表 按一般方法，如对4个因素3个水平的各种搭配都要考虑，共需做3*3*3*3=81次试验，而用正交表只需做9次试验，即选用L9表(L是正交表的代号，下标数字表示试验次数)。 级差 III/3 II/3 I/3 III（III水平试验结果总合） II （II水平试验结果总合） I （I水平试验结果总合） 1 1∶4 2 20 3 60℃ 3 3∶1 9 3 1∶6 1 10 2 25℃ 3 3∶1 8 2 1∶5 3 30 1 4℃ 3 3∶1 7 2 1∶5 1 10 3 60℃ 2 4∶1 6 1 1∶4 3 30 2 25℃ 2 4∶1 5 3 1∶6 2 20 1 4℃ 2 4∶1 4 3 1∶6 3 30 3 60℃ 1 5∶1 3 2 1∶5 2 20 2 25℃ 1 5∶1 2 1 1∶4 1 10 1 4℃ 1 5∶1 1 料液比 时间（min） 温度 [乙醇]∶ [乙醚] 试验结果 影响因素 试验号 表4 试验安排 将本试验的4个因素依次放在L9表的第1，2，3，4列，再将各列的水平数用该列因素相应的水平写出来，就得到上