多重聚合酶链反应技术快速检测志贺菌、副溶血性弧菌.docVIP

多重聚合酶链反应技术快速检测志贺菌、副溶血性弧菌志贺菌属是一类革兰阴性杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌。副溶血性弧菌是一种嗜盐弧菌，为食物中毒中常见的一种革兰阴性弧菌。检测这2种细菌，传统的方法主要依赖培养，耗时长，一般需3~7 d[1]。? 随着医学分子微生物学的不断发展，近几年研制出的单一聚合酶链反应(PCR)技术检测病原体的方法，已在许多临床实验室中开展，并显示出了较突出的优点，但仍摆脱不了检测1种病原菌，需要1种器皿的模式，还达不到简单的目的。为此，我们在研究单一PCR方法的基础上，又建立了多重PCR快速检测志贺菌和副溶血性弧菌的新方法，在同一反应管内，用两对不同的引物同时检测2种病原菌的存在[2]。?? 1材料与方法? 1.1菌种? 志贺菌不同血清型菌株10株，副溶血性弧菌10株，由上海市疾病预防控制中心提供部分标准菌株，其余均为本实验室鉴定保存菌种。? 1.2仪器?Techne Flexigene PCR扩增仪; Tanon GIS-2010全自动数码凝胶成像系统 。? 1. 3引物设计? 检测志贺菌的引物:? 上游:5 tcc gga gat tgt tcc atg tg3’;下游:5 tgt atc aca gat atg gca tgc 3’。 ? 检测副溶血性弧菌的引物:? 上游: