解磷细菌K3 的GFP 标记及其解磷能力检测 - 土壤.PDF

土 壤 (Soils), 2010, 42 (34): 329548~553 ① 解磷细菌 K3 的 GFP 标记及其解磷能力检测 * 李晓婷， 董彩霞， 杨兴明， 钟增涛， 沈其荣， 徐阳春 （南京农业大学资源与环境科学学院，江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室，南京 210095 ） 摘 要： 本文运用构建成功的含有假单胞菌属自身启动子及绿色荧光蛋白（GFP ）的质粒 pTRGFP 电转至假单胞菌解磷 细菌 K 中，通过激光共聚焦显微镜及质粒检测，获得了发光稳定的标记菌株 K GFP 。7 天液体摇瓶试验中，标记菌株 K GFP 3 3 3 的可溶性 P 含量在第 4 天达到最高 774 μg/ml，而出发菌株 K3 在第 3 天时已经达到了最大含量 780 μg/ml，说明 pTRGFP 质粒 的转入对 K 菌株解 P 能力有一定的影响。标记菌株 K GFP 施入自然土壤 10 天后数量维持在 5.47×106 CFU/g ~ 2.40×106 3 3 3 CFU/g 土，35 天后降到 5.0×10 CFU/g 土，说明解磷细菌 K GFP 可以在自然土壤中定殖。本试验为研究解磷细菌在根际及土 3 壤中的生长动态等行为特征奠定了基础。 关键词： 解磷细菌； GFP ； 解磷能力；定殖 中图分类号： S154.38 我国约有 75% 的土壤缺P ，特别是石灰性土壤， 有利用 GFP 标记固氮菌、根瘤菌、枯草芽孢杆菌、蜡 - 虽然全 P 含量较高，但能被作物吸收利用的有效 P 含 质芽孢杆菌的报道。Nomander 等[13 14]将 GFP 标记的 - 量很低[1 2] ，即使是化肥中的可溶无机 P ，施入土壤后 Pseudomonas. fluorenscence 菌株 DR54-BN14 接种于 大部分也很快转化为作物难吸收的难溶性磷酸盐。土 植株，检测标记菌在燕麦根际的定殖、生长与分布状 壤中存在一些能够将难溶性磷酸盐转化为可利用形态 况；国内有报道利用 LuxAB[15]及 GFP[16]标记解磷细 - 的微生物，这些微生物称为溶磷菌或解磷菌[3 5] 。它们 菌。K3 是自玉米根际分离的一株解磷细