家蚕表达人表皮生长因子gp67信号肽融合蛋白及生物活性的.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, January 25; 24(1): 111-116 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved. 研究报告 家蚕表达人表皮生长因子gp67 信号肽融合蛋白及生物 活性的研究 吕正兵, 张文平, 于 威, 陈 健, 聂作明, 张文伶, 张晓燕, 张耀洲 , 310018 : 人表皮生长因子(hEGF), 一种由 53 个氨基酸残基组成的单链多肽, 具有广阔的应用前景。本文主要探讨家蚕 表达人表皮生长因子 gp67 信号肽融合蛋白的生物活性。采用家蚕杆状病毒表达系统来表达该信号肽融合蛋白。构建了 重组质粒 pBacPAKS-hEGF, 将该重组质粒与线性化病毒 Bm-BacPAK6 DNA 共转染家蚕细胞, 筛选获得重组病毒 vBacPAK-SEGF, 用 vBacPAK-SEGF 感染家蚕 BmN 细胞和五龄蚕, Western blot 检测表明在家蚕细胞、五岭幼虫的血淋 巴和蛹中均有约 12 kD 的目的蛋白表达。ELISA 检测发现在家蚕细胞中的表达量为 23 μg/ 106 细胞, 五龄幼虫中的表达 量可达到 82 μg/mL 血淋巴。利用小鼠成纤维细胞 Balb/c3T3 分析家蚕表达的 hEGF 信号肽融合蛋白的生物活性, 结果 表明表达产物能显著促进 Balb/c3T3 细胞的增值。另外, 研究还发现 hEGF 信号肽融合蛋白可使新生 ICR 小鼠体重增 加, 睁眼和萌齿时间提前。本研究为进一步开发利用家蚕表达的 hEGF 提供理论基础 。 关键词: 杆状病毒表达系统, 人表皮生长因子, 信号肽融合蛋白的生物活性 Expression of Fusion Protein of hEGF and gp67 Signal Peptide in Larvae of Bombyx mori Zhengbing Lü, Wenping Zhang, Wei Yu, Jian Chen, Zuoming Nie, Wenling Zhang, Xiaoyan Zhang, and Yaozhou Zhang Institute of Biochemistry , Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China Abstract: Bombyx mori baculovirus expression vector system (BEVS) was adopted to express S-hEGF. The reconstructed plasmids of pBacPAKS-hEGF and an engineering modified BmNPV Bm-BacPAK6 DNA were used to co-transfect BmN cells in order to ob- tain recombinant virus. The recombinant virus (named vBacPAKS-hEGF) was then used to infect BmN cultured cells, the fifth instars larvae and pupa. The aimed 12 kD